[发明专利]一种猪圆环病毒II型疫苗制备

摘要

本发明公开了一种猪圆环病毒II型(PCV2)灭活疫苗大规模生产及其制备方法，包括如下技术步骤：(1)制苗用细胞高密度培养；(2)制苗毒液的繁殖；(3)加入佐剂制备灭活疫苗。与现有技术相比，本发明具有病毒产量高、毒价高、生产规模大、单批次产量高、生产成本相对较低、产品质量高且稳定、操作方便、操作空间小、工艺参数控制精确等优点。本发明灭活疫苗具有较好安全性，并可以诱导猪体产生免疫保护效果，完全符合国家生物制品标准。

主权项

一种猪圆环病毒II型疫苗制备方法，包括下列操作步骤：(1)将制苗用宿主细胞接种到含有生长用培养液与微载体的载体罐内，并将上述细胞与微载体混合均匀，使细胞贴附在微载体上；在适当培养环境下，提供上述细胞生长足够的养分及气体环境，使细胞在上述微载体上生长至接种浓度的5～40倍；(2)将细胞生长用培养液更换为维持用培养液，并同步加入猪圆环病毒II型种毒，先使其吸附在细胞上，然后进行培养，增殖病毒；(3)培养24小时后将细胞维持液弃去，接种病毒的细胞以0.01mol/L的PBS充分洗涤，加入D-氨基葡萄糖孵育30min；(4)弃去D-氨基葡萄糖，将细胞以0.01mol/L、pH为7.4的PBS充分洗涤，加入细胞维持液继续培养细胞；(5)连续培养10天后，收获病毒液，于-20℃冻融两次，得到猪圆环病毒II型病毒液；(6)病毒液经检验合格后，加入甲醛灭活，灭活后的猪圆环病毒II型加入常规油性佐剂或双相佐剂，搅拌混匀，制得油乳剂疫苗或双相疫苗。