[发明专利]一种确定牛乳过敏原表位关键氨基酸的方法

摘要

一种确定牛乳过敏原表位关键氨基酸的方法，根据初步确定的模拟表位区氨基酸序列，合成表位肽段，固定和保护，其C端共价结合到活化的纤维膜上，N端被乙酰化；用单个甘氨酸作为阴性对照，将合成的氨基酸序列与多克隆血清反应，确定β-乳球蛋白的主要表位；将主要表位中的每个氨基酸依次被丙氨酸或甘氨酸取代，得到需合成的氨基酸序列；将得到的氨基酸序列，合成表位肽段，固定和保护，其C端共价结合到活化的纤维膜上，N端被乙酰化；用单个甘氨酸作为阴性对照，将合成的氨基酸序列与多克隆血清反应，确定牛乳表位中的关键氨基酸。本发明可为乳过敏的诊断、治疗以及食品中过敏原的检测奠定基础，为开发低过敏性牛乳提供理论依据和技术支持。

主权项

一种确定牛乳过敏原表位关键氨基酸的方法，利用免疫亲和纯化的特异性兔血清对噬菌体随机七肽库进行亲和淘选，并借助网络工具MIMOX分析，确定β-乳球蛋白过敏原的表位区，其特征是：(1)根据初步确定的模拟表位区氨基酸序列，合成表位肽段，并固定和保护，合成肽段的C端共价结合到活化的纤维膜上，N端被乙酰化；(2)用单个甘氨酸作为阴性对照，将合成的氨基酸序列与多克隆血清反应，根据反应的强度，确定β-乳球蛋白的主要表位；(3)将β-乳球蛋白的主要表位中的每个氨基酸依次被丙氨酸或甘氨酸取代，得到需合成的氨基酸序列；(4)由步骤3得到的氨基酸序列，再合成表位肽段，并固定和保护，合成肽段的C端共价结合到活化的纤维膜上，N端被乙酰化；(5)用单个甘氨酸作为阴性对照，将合成的氨基酸序列与多克隆血清反应，根据反应的强度，确定牛乳表位中的关键氨基酸。