[发明专利]一种微量核酸检测方法

摘要

一种微量核酸检测方法，本方法利用UltraPower DNA核酸染料与核酸结合荧光信号会增强800-1000倍的原理，采用了计算机程序进行分析最低可检出12.5pg/μL核酸。本发明极大的避免外部因素如盐离子浓度、pH、DNA提取试剂残留(如乙醇，苯酚，氯仿等)的影响，尤其适用于对微量DNA的定量。

主权项

一种微量核酸检测方法，其特征在于：该方法的步骤为：(1)仪器安装：首先将UltraPower可见光凝胶透射仪置于水平桌面；使用时，直接把变压器电源插头接变压器插口，安装完毕待用；(2)试验操作：将待测样品准备好，同时准备已知浓度的标准品DNA，染料为自主研发的UltraPower核酸染料(即用型)，具体操作步骤：A标准品的处理：标准品的浓度并不十分固定，可根据需要进行调整，一般核酸的终浓度在10‑2000pg/μL的条件下，可以得到比较好的线性关系，将标准品用蒸馏水稀释至浓度为：1600，800，400，200，100，50，25pg/L，同时以用于稀释标准品核酸的蒸馏水做空白对照；B在透明管内进行操作，如可以使用PCR管或八连管，将标准品和样品与UltraPower核酸染料(即用型)等体积混匀(如5μL核酸溶液与5μLUltraPowerTM核酸染料(即用型)混匀)此时标准品核酸的终浓度为800，400，200，100，50，25，12.5，0pg/μL，在室温下避光放置30min，使UltraPowerTM核酸染料与待测DNA充分反应，反应结束后将反应管放在透射仪的蓝色显色板上，将暗箱盖好；(3)DNA成像：打开UltraPower可见光凝胶透射仪的电源，由于UltraPower核酸染料与待测DNA反应后会发出荧光，通过暗箱上方的显色片就可以清楚的观测到发光的DNA样品，用数码相机拍照； (4)DNA样品浓度分析：拍照后，打开计算机，进入pgdetect程序，将上步中拍好的图片导入pgdetect程序，点击检测按钮进行DNA浓度分析；pgdetect程序界面主要有以下几个部分组成：A添加控制点：首先点击添加控制点，对标准品进行设定，鼠标点击对应的标准品，在pgdetect的界面右上角的表格中的序号一列中会自动出现控制点序号即1，2，3，4，5等，双击序号在浓度一栏中输入相应的浓度；B删除选中控制点：对控制点进行删除，首先选中要删除的控制点，点击此按钮即可，C保存控制点信息：对控制点信息进行保存。点击此按钮，即可保存当前界面的控制点信息；D读取控制点信息：点击此按钮，即可利用已经保存的控制点信息，对当前的未知样品进行定量检测；E计算当前点浓度：点击此按钮后，鼠标点击样品点处，在程序左下角即会出现未知样品浓度值。