[发明专利]一种空肠弯曲菌荧光定量PCR检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明提供一种空肠弯曲菌荧光定量PCR基因检测方法及其试剂盒，用该方法能够快速准确地检测空肠弯曲菌，减少了假阳性。所述试剂盒，包括如下试剂：PCR MIX反应液：5×FQ PCR buffer、浓度为10uM的引物混合物、浓度为10uM的TaqMan探针混合物、浓度为10mM的dNTPs和ddH2O，其中所述引物混合物中含有：16S rRNA上游引物F、16S rRNA下游引物R、上游引物hipO-F和下游引物hipO-R，TaqMan探针混合物中含有：16S rRNA-P和hipO-P；(2)Taq酶；(3)阳性标准品和阴性标准品。本发明引入了高效、特异性强的扩增引物和荧光探针，使得空肠弯曲菌检测的灵敏度和特异性大大提高，避免了漏检和误检。

主权项

一种空肠弯曲菌荧光定量PCR基因检测试剂盒，包括如下试剂：(1)PCR MIX反应液：5×FQ PCR buffer、浓度为10uM的引物混合物、浓度为10uM的TaqMan探针混合物、浓度为10mM的dNTPs和ddH2O，其中所述引物混合物中含有：16S rRNA上游引物F、16S rRNA下游引物R、上游引物hipO-F和下游引物hipO-R，TaqMan探针混合物中含有：16S rRNA-P和hipO-P；所述16S rRNA上游引物F序列为：5’-TGCTTAACACAAGTTGAGTAGG-3’；所述16S rRNA下游引物R序列为：5’-TTCCTTAGGTACCGTCAGAA-3’；所述上游引物hipO-F序列为：5’-TAGGACTTCGTGCAGATATGG-3’；所述下游引物hipO-R序列为：5’-AATCCATCTTCTATCATTGCCT-3’；所述16S rRNA-P序列为：5’-AACCCTGACGCAGCAACGCCGC-3’，其5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团；所述hipO-P序列为：5’-AGCACCACCCAAACCCTCTTCAGC-3’，5’端标记荧光报告基团，3’端标记荧光淬灭基团。(2)Taq酶；(3)阳性标准品和阴性标准品，所述阳性标准品是浓度为1×107copies/mL的目的片段重组质粒。