[发明专利]一种鉴定春兰品种的方法

摘要

本发明提供一种春兰品种分子鉴定方法，是基于简单重复序列基因组分析的春兰品种分子鉴定方法，通过优化春兰简单重复序列(SSR)分析的技术体系，明晰春兰品种的遗传关系。本发明直接检测品种的DNA序列差异，既具有遗传稳定性，又具有信息多样性，可以明确区分和判别春兰的不同品种，实现准确、快速鉴定品种，从而为品种鉴定、种苗市场管理、品种保护及良种繁育等提供可靠技术。本发明优化春兰基因组DNA的SSR技术体系，使春兰品种分子鉴定速度快、时间短、多态性多，能够在交易前解决兰苗真实性检验等问题，避免造成生产者或购买者的损失。本方法运用1个及以上有效引物可以区分和鉴定所有春兰品种，实现春兰品种的DNA指纹鉴定。

主权项

一种鉴定春兰品种的方法，通过以下步骤实现：(1)提取已知112个春兰品种基因组DNA；(2)对所提取的春兰品种基因组DNA分别进行聚合酶链式反应，得到简单重复序列产物；(3)以6％变性聚丙烯酰胺凝胶为介质对简单重复序列产物进行电泳分离，总上样量为5μL，其中4μL为扩增产物，另加1μL Loading Buffer，在60W下恒功率电泳至marker跑至胶板2/3处；(4)电泳结束后，经Bassam银染方法在数码相机下照相，分别得到简单重复序列标准图谱；(5)选择清晰简单重复序列图谱，采用“0-1”系统记录谱带，将有带的赋值为1，无带的赋值为0，读取春兰每个品种材料在不同引物扩增的产物的电泳谱带的数据，建立数据库；(6)基于Dice系数按非加权配对算术平均法进行聚类分析，得到系统聚类树；(7)将所需鉴定的春兰品种按上述步骤(1)-(5)，得到所需要鉴定春兰品种的序列图谱，将此序列图谱与标准图谱进行比较判定，得到分析鉴定结果。