[发明专利]一种具有增强免疫作用的桦褐孔菌胞内外混合粗多糖

摘要

本发明涉及医药技术领域，具体为从药用真菌桦褐孔菌液体深层发酵产物中提取得到一种具有免疫增强作用的桦褐孔菌胞内外混合粗多糖。无菌条件下取斜面菌种接入盛有新鲜的综合固体培养基的平皿内，经过一级发酵、二级发酵，将二级发酵产物进行抽滤，得到桦褐孔菌菌丝体和发酵清液；经浓缩、水提醇沉得到桦褐孔菌胞内外混合粗多糖。体内实验证明桦褐孔菌胞内外混合粗多糖均能延长小鼠肝癌H22和S180腹水瘤小鼠的生存时间；并能显著提高其胸腺指数和脾指数。而且能明显促进荷瘤小鼠血清中IL-2、TNF-α细胞因子的分泌。桦褐孔菌胞内外混合粗多糖可用于制备新的免疫增强制剂。本发明对开发利用药用真菌资源开辟了新的途径。

主权项

一种具有增强免疫作用的桦褐孔菌胞内外混合粗多糖，其特征在于它是由下列方法得到的：一、无菌条件下取斜面菌种接入新鲜的综合固体培养基的平皿内，培养温度26-29℃，培养240-360小时；该综合固体培养基配方(g/100ml)：马铃薯16-26，葡萄糖1.2-3.2，琼脂1.5-2.5，MgSO40.12-0.2，KH2PO40.28-0.35，VB10.8-1.2mg加水定溶至所需体积，PH值自然；二、一级发酵：在无菌条件下，用6mm的打孔器菌落边缘处打孔，用接种铲取6-10块的菌饼接入含有100-150ml液体培养基的250ml摇瓶中，置于26-29℃，转速为120-185rpm/min的摇床中，恒温培养210-300小时后进行二级发酵培养；该液体培养基配方(g/100ml)：马铃薯16-26，葡萄糖1.2-3.2，MgSO40.12-0.2，KH2PO40.28-0.35，VB10.8-1.2mg加水定溶至所需体积，PH值自然；三、二级发酵：取一级发酵液接种于含有250-350ml该液体培养基的1000ml二级摇瓶中，接种量为10％-13％，置于26-29℃，转速为120-170rpm/min的摇床中，恒温培养160-240小时；四、将二级发酵产物进行抽滤，得到桦褐孔菌的菌丝体和发酵液；将菌丝体用蒸馏水冲洗三次，置55-60℃鼓风干燥箱中烘干，称重，60目粉碎，按蒸馏水与菌丝体粉末比45-50∶1置于超声仪内，48-52℃，65-75Hz超声提取40min，重复提取2-3次，合并提取液，45-55℃减压浓缩至原体积的1/5-1/10，得胞内多糖浓缩液；将发酵液于45-55℃减压浓缩至原体积的1/5-1/10，并与胞内多糖浓缩液合并，加入95％乙醇，搅拌，使乙醇终浓度达到75％-80％，4℃沉淀8-12小时，收集沉淀，用无水乙醇洗涤3次，55-60℃恒温干燥，重复2～3次，得桦褐孔菌胞内外混合粗多糖。硫酸-苯酚法测得多糖含量为45％-75％。