[发明专利]一种简易的植物人工microRNA构建方法无效
| 申请号： | 201010132894.1 | 申请日： | 2010-02-25 |
| 公开（公告）号： | CN101824410A | 公开（公告）日： | 2010-09-08 |
| 发明（设计）人： | 陈剑平;燕飞;鲁宇文;林林;郑红英;程晔 | 申请（专利权）人： | 浙江省农业科学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 杭州九洲专利事务所有限公司 33101 | 代理人： | 陈继亮 |
| 地址： | 310021 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种简易的植物人工microRNA构建方法，该方法的步骤如下：(1)用于植物人工microRNA构建的植物天然miRNA前体克隆；(2)用于植物人工microRNA构建的人工miRNA序列预测；(3)用于植物人工microRNA构建的引物设计合成；根据miRNA前体序列和人工miRNA序列设计具有如下特征的引物对：Primer F：sequenceA-sequence1-artificial miRNA sequence-sequnce2；Primer R：sequenceB-sequence3-artificial miRNA*RC sequence-sequnce4；(4)用于植物人工microRNA构建的PCR扩增体系。本发明有益的效果是：可用于植物miRNA构建，本发明具有的技术优势是操作简便快捷，省去了原来需要4次PCR才能完成的构建过程。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 简易 植物 人工 microrna 构建 方法 | ||
【主权项】：
一种简易的植物人工microRNA构建方法，其特征是：该方法的步骤如下：(1)、用于植物人工microRNA构建的植物天然miRNA前体克隆；(2)、用于植物人工microRNA构建的人工miRNA序列预测；将预测的人工miRNA序列与靶基因序列比对，靶基因序列上与人工miRNA序列互补的序列即是后续构建工作中的miRNA*序列；(3)、用于植物人工microRNA构建的引物设计合成；根据miRNA前体序列和人工miRNA序列设计具有如下特征的引物对：Primer F：sequenceA-sequence1-artificial miRNA sequence-sequnce2Primer R：sequenceB-sequence3-artificial miRNA*RC sequence-sequnce4该序列中，sequnce1为前体中miRNA区域外侧序列，长度为0-50nt；aritificial miRNAsequence为人工miRNA序列；sequence2为前体中miRNA区域内侧序列，长度为5-50nt；sequence3为前体中miRNA*区域外侧序列的反向互补序列，长度为0-50nt；aritificial miRNA*RC sequence为人工miRNA*序列的反向互补序列；sequence4为前体中miRNA*区域内侧序列的反向互补序列，长度为5-50nt；sequence A和B为用于酶切连接的核酸内切酶识别序列或是用于拓扑连接的重组序列；(4)、用于植物人工microRNA构建的PCR扩增体系。
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