[发明专利]一种小鼠精原干细胞分离培养方法

摘要

本发明公开了一种小鼠精原干细胞分离培养方法，利用中性蛋白酶消化性质温和、高效、对细胞刺激性小的特点分离小鼠精原干细胞，将小鼠精原干细胞的富集步骤与传代有机结合，使用中性蛋白消化贴壁的小鼠精原干细胞集落，达到较好的富集效果。本发明具有分离培养操作简单，时间短，效果好，且成本低的特点。

主权项

一种小鼠精原干细胞分离培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、小鼠精原干细胞分离：小鼠的睾丸去除白膜后，收集生精小管，加入中性蛋白酶，在35-39℃下消化20-30分钟，待消化液中出现白色絮状漂浮物时收集消化液进行离心，离心液去上清后洗涤，然后用小鼠精原干细胞培养液进行重悬、筛分，筛分得到的滤液接种至含小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的培养皿中；(2)、小鼠精原干细胞培养与传代：将小鼠精原干细胞培养液加入到所述含小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的培养皿中培养小鼠精原干细胞，培养2-3天后滴加中性蛋白酶至培养皿中，消化时间2-3s，轻微震荡培养皿使小鼠精原干细胞集落脱落，然后添加DMEM基础培养基使脱落的集落悬浮得悬液，悬液进行离心、再用小鼠精原干细胞培养液重悬，将重悬后的细胞悬液接种至新的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上进行培养。