[发明专利]气相色谱/质谱联和高效液相色谱测定中药里安定成分的方法

摘要

一种气相色谱/质谱联和高效液相色谱测定中药里安定成分的方法是采用溶剂抽提，气相色谱/质谱联合高液相色谱的对中药里安定成分的测定分析法。所用气相色谱采用DB-5MS柱，30米长，0.25毫米内径的色谱柱，液相色谱分析采用了3个色谱柱串联。这使色谱分析呈现了高分辨特性，确保了准确定性。样品制备采用乙醇试剂，对人无毒，有利环保。液相色谱流动相也采用乙醇，避免了分析中制备样品的沉淀也有利环境保护。中药成分极其复杂，分离和鉴定都较困难，本方法开拓了中药中安定成分的检测方法。

主权项

一种气相色谱/质谱联和高效液相色谱测定中药里安定成分的方法，其特征在于包括如下步骤：本发明具体的测定分析法包括如下步骤：一、测定仪器和实施条件：①.Waters Breeze 1525高效液体色谱仪，美国制造，仪器配有Waters1525 Binary高效液体色谱泵，Dualλ2487紫外检测器，色谱柱型号为VP-ODS SHIMADZU，4.6x150mm，3个色谱柱，日本制造，分析中以3个色谱柱串联使用，色谱流动相为乙醇，流速0.6毫升/分，色谱柱压为2400PSI，柱温14℃，紫外波长选在254nm；②菲尼根跟踪气相色谱/质谱分析仪由美国菲尼根公司提供，气相色谱/质谱分析的条件：色谱柱是一个DB-5MS柱，30米长，0.25毫米内径，薄膜厚度为0.25毫，载气为氦气1.0ml/min，初始温度为70℃，保持4分钟，然后以10℃/分钟上升率，最后加热至250℃，停留3分钟，电子轰击为70电子伏，原子质量范围为30-350；③试剂和样品试剂乙醇为分析纯试剂；外标物为西药：纯舒乐安定，其来自艾司唑仑片，化学名为6-苯基-8-氯-4H-〔1，2，4〕-三氮唑〔4，3-α(1，4)苯并二氮杂卓定；纯氯硝安定，来自氯硝西泮片，化学名为1，3-二氢-7-硝基-5-(2-氯苯基)-2H-1，4-苯并二氮杂卓-2-酮；(1)中药成分的抽提和制备将中药研磨成粉末，称取0.1-0.5克，加入50毫升乙醇，置于超声波设备中，进行1小时处理，再放置24小时，过滤，以清液进行仪器分析；(2)中药中安定成分的定性分析(一)、色谱/质谱定性①色谱保留值定性法：在相同的色谱条件下，中药分离谱图中的组分，若其色谱保留时间和对应的纯试剂的色谱保留时间是一致的，说明中药具有对应外标物的安定成分；若其色谱保留时间和对应的纯试剂的色谱保留时间不同，说明中药不具有对应外标物的安定成分；②质谱比较定性法：中药分离谱图中的组分，若其质谱特征图和所对应的纯试剂的质谱特征图是基本一致，即其质谱图的质荷比为m/z相同，并具有较高的匹配度，说明中药具有对应外标物的安定成分，若其质谱特征图和对应的纯试剂的质谱特征图不同，说明中药不具有对应外标物的安定成分；(二)、高效液相色谱定性：以HPLC分离中药时，对所确定的成分，若其色谱保留时间和对应的纯试剂的色谱保留时间是一致，说明中药具有对应外标物的安定成分，若其色谱保留时间和对应的纯试剂的色谱保留时间不一致的，说明中药不具有对应外标物的安定成分；(3)中药成分的定量测定在前述定性的基础上，采用高效液相色谱外标法定量，以所确定中药成分的对应试剂为外标物，其制备如下：将外标物研磨成粉末，称取0.01-0.05克，加入50毫升乙醇，置于超声波设备中，进行1小时的处理，放置24小时，过滤，取清液进行仪器分析，过程中滤纸和三角瓶都需要称重以计算真正的溶解浓度；外标法定量时，其计算公式如下W％＝R样/R外标×C外标/C样×V外标/V样×100％--------------------(1)式中W％代表中药成分中所含安定成分的重量百分含量，R样代表中药中所含安定成分的HPLC响应值，R外标代表外标安定的HPLC响应值，C外和C样分别代表外标和中药所配制的浓度，浓度单位为克/毫升，V外标和V样分别代表外标和中药在色谱分析中的进样量，进样量单位为微升。