[发明专利]三七不定根的培养方法

摘要

本发明提供一种三七不定根的培养方法，包括三七愈伤组织的诱导、三七愈伤组织的扩增与继代培养、三七不定根的诱导、三七不定根的扩繁与继代培养、三七不定根不同根系的筛选和扩繁及三七不定根的反应器培养本培养方法简单、效率高，次生代谢产物含量高、主要皂苷成分均得以表达且其比例与药材相近；不定根生长迅速、无内生真菌污染，本培养工艺操作简单、重复性好、规模生产迅速方便。

主权项

一种三七不定根的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)三七愈伤组织的诱导：将三七根消毒，切成小片，接种于MS固体培养基上，在无菌、室温及避光条件下培养3‑5周可见愈伤组织形成；(2)三七愈伤组织的扩增与继代培养：将诱导出的愈伤组织接种于MS固体培养基上，加入植物生长调节剂，在无菌、室温及避光条件下培养3‑5周；(3)三七不定根的诱导：将扩增出的愈伤组织接种于MS固体培养基上，在无菌、室温及避光条件下培养3‑5周，可见不定根的形成；(4)三七不定根的扩繁与继代培养：将已形成的不定根接种于MS固体培养基上，加入植物生长调节剂，在无菌、室温及避光条件下培养3‑5周；(5)三七不定根不同根系的筛选和活性成分的测定及扩繁：对培养出的不同生长情况、不同颜色及不同粗细的不定根进行分类，进行扩繁与继代培养，待株系稳定后，进行活性成分的测定，并建立相应成分的指纹图谱，然后根据检测结果筛选出最优不定根系，并接种于内装含3％蔗糖的MS液体培养基的不同体积三角瓶中，并加入浓度为1mg/L的IBA植物生长调节剂，在100rpm速度的摇床上、25℃避光条件下进行扩繁，培养周期为3‑4周。(6)三七不定根的反应器培养：将不定根接种于内部装有含3‑5％蔗糖的MS液体培养基的气升式反应器中，并加入浓度为1mg/L的IBA植物生长调节剂，在供气速度为0.1vvm、18‑25℃及避光或光照条件下进行培养，培养周期为6‑12周，即得三七不定根。