[发明专利]油菜茎基溃疡病菌的实时荧光PCR检测方法及检测用引物和探针有效
| 申请号： | 201010142449.3 | 申请日： | 2010-04-08 |
| 公开（公告）号： | CN101805794A | 公开（公告）日： | 2010-08-18 |
| 发明（设计）人： | 易建平;尚琳琳;周国梁 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国上海出入境检验检疫局 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;G01N21/64 |
| 代理公司： | 上海浦一知识产权代理有限公司 31211 | 代理人： | 王函 |
| 地址： | 200135 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种油菜茎基溃疡病菌的实时荧光PCR检测方法及检测用引物和探针，根据油菜茎基溃疡病菌L.maculans与其近似种ITS序列的差异，设计了检测L.maculans的引物Lmb3(5’-caccaattggatccccta-3’)/R2(5’-ggcgcaaaa tgtgctgcgct-3’)和探针Probe-M(5’-FAM-cacttgggactcgccttg-MGB-3’)，建立了L.maculans的实时荧光PCR检测方法。该检测方法的灵敏度达到4pg菌丝DNA，整个检测过程控制在4小时内，其快速、特异和灵敏的特点可以满足进境油菜籽样品的快速初检以及病菌分离物的快速鉴定。 | ||
| 搜索关键词： | 油菜 溃疡 病菌 实时 荧光 pcr 检测 方法 引物 探针 | ||
【主权项】：
一种油菜茎基溃疡病菌的实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)设计引物和探针；该引物的序列为：Lmb3：5’-caccaattggatccccta-3’(SEQ ID NO.1)或其互补链；R2：5’-ggcgcaaaatgtgctgcgct-3’(SEQ ID NO.2)或其互补链；该探针的序列为：Probe-M：5’-FAM-cacttgggactcgccttg-MGB-3’(SEQ ID NO.3)或其互补链；(2)对油菜籽样品进行过筛处理，然后收集菌丝并提取DNA；(3)采用步骤(1)设计的引物和探针进行实时荧光PCR检测。
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