[发明专利]一种抗糖尿病的单克隆抗体

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体的说是一种抗糖尿病的单克隆抗体，其特征在于具体的生产工艺是：(1)T淋巴细胞尼龙毛分离法，取小鼠BaLb/C外周血，用尼龙毛柱L型来分离T淋巴细胞，将粘附于尼龙毛上的T淋巴细胞洗到培养基中，离心，用RPMI-1640培养液洗涤，然后再离心收集分离后的T淋巴细胞；本发明与现有技术相比，工艺流程简单，具有与T淋巴细胞表面抗原蛋白高特异性，高亲合力结合并具有生物活性能阻断T细胞对胰腺中β细胞损害的单克隆抗体。

主权项

一种抗糖尿病的单克隆抗体，其特征在于具体的生产工艺是：(1)T淋巴细胞尼龙毛分离法，取小鼠BaLb/C外周血，用尼龙毛柱L型来分离T淋巴细胞，将粘附于尼龙毛上的T淋巴细胞洗到培养基中，离心，用RPMI-1640培养液洗涤，然后再离心收集分离后的T淋巴细胞；(2)动物免疫，第一次免疫，T淋巴细胞悬液1X107/0.3ml，大鼠腹腔内直接注射，第二次免疫，两周后，T淋巴细胞悬液1X107/0.3ml，腹腔内再注射。二周后采血测其效价，检测免疫效果。取脾脏收集B细胞，(3)细胞融合，将免疫后的B细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，在HAT培养液中培养，筛选，(4)克隆杂交瘤细胞，用有限稀释法来分离第一次筛选后的杂交瘤细胞，然后将细胞放置96孔板培养皿中培养一周，中间换一次培养液。二周后，再用有限稀释法来分离96孔板培养皿中的杂交瘤细胞；(5)克隆单杂交瘤细胞，将上述第四步分离得到的杂交瘤细胞分别放置0.3％琼脂RPMI-1640(含有10％胎牛血清)培养四周，然后分别挑出细胞集落进一步培养，几周后能得到大量的杂交瘤细胞；(6)抗体的测定，将大量的杂交瘤细胞放置无血清的培养液中培养，每三天收集一次培养液，离心后保留上清液(含有单克隆抗体)，杂交瘤细胞再进一步培养。用5升的上清液纯化抗体；(7)抗体的应用，两种单克隆抗体各100微克混合在一起，NOD小鼠腹腔内注射，一周后再腹腔内注射一次，然后观察血糖和胰岛素的变化。