[发明专利]以聚乙二醇作为沉淀剂用于蛋白质结晶筛选96条件试剂盒

摘要

本发明公开了一种以聚乙二醇作为沉淀剂用于蛋白质结晶筛选96条件试剂盒，其目的是解决现有的96条件筛选试剂盒在蛋白质结晶条件筛选中成功率低的技术问题。技术方案是采用的PEG是BMCD数据库中统计出的使用频率最高的前8种，不是随机选取，显著地提高了生物大分子结晶的成功率。如刀豆球蛋白的成功率由背景技术的4.2％提高到81.2％，溶菌酶的成功率由背景技术的29.2％提高到46.9％，蛋白酶K的成功率由背景技术的58.3％提高到66.7％，过氧化氢酶的成功率由背景技术的15.6％提高到30.2％。另外由于本试剂盒是以PEG为沉淀剂的，所用试剂种类较少，相对背景技术试剂盒成本较低。

主权项

一种以聚乙二醇为基础的96条件生物大分子结晶筛选试剂盒，其特征在于成分组成如下表：  序号  缓冲液  pH  沉淀剂  添加剂  A1  0.1M乙酸钠  pH 4.6  20％PEG4000  0.1M硫酸铵  A2  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  20％PEG4000  0.1M甲酸钠  A3  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  20％PEG4000  0.1M氯化镁  A4  0.1M  N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  20％PEG4000  0.1M丙二酸钠  A5  0.1M乙酸钠  pH 4.6  25％PEG4000  10％v/v 2-甲基-2，4戊二醇  A6  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  25％PEG4000  10％v/v  乙二醇  A7  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  25％PEG4000  10％v/v异丙醇  A8  0.1M  N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  25％PEG4000  0.1M丙二酸钠  A9  0.1M乙酸钠  pH 4.6  30％PEG4000  0.1M甘氨酸  A10  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  30％PEG4000  0.1M酒石酸钾钠  A11  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  30％PEG4000  0.01M乙二胺四乙酸  A12  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  30％PEG4000  10％v/v  Tacsimate PH 7.0  B1  0.1M乙酸钠  pH 4.6  10％PEG8000  0.1M硫酸铵  B2  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  10％PEG8000  0.1M甲酸钠  B3  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  10％PEG8000  0.1M氯化镁  B4  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  10％PEG8000  0.1M丙二酸钠  B5  0.1M乙酸钠  pH 4.6  15％PEG8000  10％v/v 2-甲基-2，4戊二醇  B6  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  15％PEG8000  10％v/v  乙二醇  B7  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  15％PEG8000  10％v/v异丙醇  B8  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  15％PEG8000  0.1M丙二酸钠  B9  0.1M乙酸钠  pH 4.6  20％PEG8000  0.1M甘氨酸  B10  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  20％PEG8000  0.1M酒石酸钾钠  B11  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  20％PEG8000  0.01M乙二胺四乙酸  B12  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  20％PEG8000  10％v/v  Tacsimate PH 7.0  C1  0.1M乙酸钠  pH 4.6  10％PEG6000  0.1M硫酸铵  C2  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  10％PEG6000  0.1M甲酸钠  C3  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  10％PEG6000  0.1M氯化镁  C4  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  10％PEG6000  0.1M丙二酸钠  C5  0.1M乙酸钠  pH 4.6  15％PEG6000  10％v/v 2-甲基-2，4戊二醇  C6  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  15％PEG6000  10％v/v乙二醇  C7  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  15％PEG6000  10％v/v异丙醇  C8  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  15％PEG6000  0.1M丙二酸钠  C9  0.1M乙酸钠  pH 4.6  20％PEG6000  0.1M甘氨酸  C10  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  20％PEG6000  0.1M酒石酸钾钠  C11  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  20％PEG6000  0.01M乙二胺四乙酸  C12  0.1M  N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  20％PEG6000  10％v/v  Tacsimate PH 7.0  D1  0.1M乙酸钠  pH 4.6  20％PEG3350  0.1M硫酸铵  D2  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  20％PEG3350  0.1M甲酸钠  D3  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  20％PEG3350  0.1M氯化镁  D4  0.1M  N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  20％PEG3350  0.1M丙二酸钠  D5  0.1M乙酸钠  pH 4.6  25％PEG3350  10％v/v 2-甲基-2，4戊二醇  D6  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  25％PEG3350  10％v/v乙二醇  D7  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  25％PEG3350  10％v/v异丙醇  D8  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  25％PEG3350  0.1M丙二酸钠  D9  0.1M乙酸钠  pH 4.6  30％PEG3350  0.1M甘氨酸  D10  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  30％PEG3350  0.1M酒石酸钾钠  D11  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  30％PEG3350  0.01M乙二胺四乙酸  D12  0.1M  N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  30％PEG3350  10％v/v  Tacsimate PH 7.0  E1  0.1M乙酸钠  pH 4.6  15％PEG400  0.1M硫酸铵  E2  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  15％PEG400  0.1M甲酸钠  E3  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  15％PEG400  0.1M氯化镁  E4  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  15％PEG400  0.1M丙二酸钠  E5  0.1M乙酸钠  pH 4.6  20％PEG400  10％v/v 2-甲基-2，4戊二醇  E6  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  20％PEG400  10％v/v乙二醇  E7  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  20％PEG400  10％v/v异丙醇  E8  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  20％PEG400  0.1M丙二酸钠  E9  0.1M乙酸钠  pH 4.6  25％PEG400  0.1M甘氨酸  E10  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  25％PEG400  0.1M酒石酸钾钠  E11  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  25％PEG400  0.01M乙二胺四乙酸  E12  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  25％PEG400  10％v/v  Tacsimate PH 7.0  F1  0.1M乙酸钠  pH 4.6  15％PEG1000  0.1M硫酸铵  F2  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  15％PEG1000  0.1M甲酸钠  F3  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  15％PEG1000  0.1M氯化镁  F4  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  15％PEG1000  0.1M丙二酸钠  F5  0.1M乙酸钠  pH 4.6  20％PEG1000  10％v/v 2-甲基-2，4戊二醇  F6  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  20％PEG1000  10％v/v乙二醇  F7  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  20％PEG1000  10％v/v异丙醇  F8  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  20％PEG1000  0.1M丙二酸钠  F9  0.1M乙酸钠  pH 4.6  25％PEG1000  0.1M甘氨酸  F10  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  25％PEG1000  0.1M酒石酸钾钠  F11  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  25％PEG1000  0.01M乙二胺四乙酸  F12  0.1M  N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  25％PEG1000  10％v/v  Tacsimate PH 7.0  G1  0.1M乙酸钠  pH 4.6  10％PEG2000  0.1M硫酸铵  G2  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  10％PEG2000  0.1M甲酸钠  G3  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  10％PEG2000  0.1M氯化镁  G4  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  10％PEG2000  10％v/v  Tacsimate PH 7.0  G5  0.1M乙酸钠  pH 4.6  15％PEG2000  10％v/v 2-甲基-2，4戊二醇  G6  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  15％PEG2000  10％v/v乙二醇  G7  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  15％PEG2000  10％v/v异丙醇  G8  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  15％PEG2000  10％v/v Tacsimate PH 7.0  G9  0.1M乙酸钠  pH 4.6  20％PEG2000  0.1M甘氨酸  G10  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  20％PEG2000  0.1M酒石酸钾钠  G11  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  20％PEG2000  0.01M乙二胺四乙酸  G12  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  20％PEG2000  10％v/v  Tacsimate PH 7.0  H1  0.1M乙酸钠  pH 4.6  15％PEG1500  0.1M硫酸铵  H2  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  15％PEG1500  0.1M甲酸钠  H3  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  15％PEG1500  0.1M氯化镁  H4  0.1M  N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  15％PEG1500  10％v/v  Tacsimate PH 7.0  H5  0.1M乙酸钠  pH 4.6  20％PEG1500  10％v/v 2-甲基-2，4戊二醇  H6  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  20％PEG1500  10％v/v乙二醇  H7  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  20％PEG1500  10％v/v异丙醇  H8  0.1M  N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  20％PEG1500  10％v/v  Tacsimate PH 7.0  H9  0.1M乙酸钠  pH 4.6  25％PEG1500  0.1M甘氨酸  H10  0.1M柠檬酸钠  PH 5.6  25％PEG1500  0.1M酒石酸钾钠  H11  0.1M 2，2-双二羟甲基苯胺  PH 6.5  25％PEG1500  0.01M乙二胺四乙酸  H12  0.1M N-2-羟乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸  PH 7.5  25％PEG1500  10％v/v Tacsimate PH 7.0