[发明专利]固定化过氧化物酶的制备方法

摘要

本发明涉及一种固定化过氧化物酶的制备方法，包括载体的预处理，用超声波将磁铁颗粒分散到壳聚糖和冰醋酸的溶液中，加入含乳化剂的石蜡油，加入戊二醛溶液，干燥后得到表面包裹壳聚糖的磁铁颗粒、成膜材料的选择，选择聚磺化苯乙烯钠盐和聚盐酸烯丙胺分别作载体的A层膜电解质材料和B层膜电解质材料、配置过氧化物酶溶液、静电交替沉积，经过A层膜的吸附和B层膜的吸附等步骤。本发明用层层自组装技术将过氧化物酶固定化到纳米磁铁颗粒的表面，不仅具有固定酶量多，且酶活力保留量较大；本发明制得的固定化过氧化物酶活性高，有很高的稳定性，可以回收循环利用，可以用于含苯酚苯胺废水的无害化处理。

主权项

一种固定化过氧化物酶的制备方法，其特征是，包括以下步骤：a.载体的预处理：用超声波将磁铁颗粒按质量体积比为1∶10～1∶20的比例分散到含20g/L壳聚糖和1％冰醋酸的溶液中，混合均匀，充分搅拌下逐滴加入含乳化剂的石蜡油，继续搅拌，加入戊二醛溶液作为交联剂，40℃下反应1h，然后加入适量NaOH溶液，调节pH至9～10，用石油醚或乙醇洗去多余的壳聚糖和石蜡油，干燥后得到表面包裹壳聚糖的磁铁颗粒；b.成膜材料的选择：选择聚磺化苯乙烯钠盐和聚盐酸烯丙胺分别作载体的A层膜电解质材料和B层膜电解质材料，用10mmol的醋酸缓冲液配制浓度为2％～5％的聚电解质溶液，加0.05％～0.08％NaCl溶液控制聚电解质溶液的离子强度；c.配置过氧化物酶溶液：用pH4.5～5.5醋酸缓冲液配制酶活力为250U/mg的过氧化物酶溶液；d.静电交替沉积：A层膜的吸附：将载体置于A层膜聚电解质溶液和过氧化物酶溶液的混合溶液中，通过静电作用，使过氧化物酶沉积吸附在载体表面，吸附20min～60min后，用缓冲液冲洗2min～20min；B层膜的吸附：将经过A层膜吸附后的载体置于B层膜聚电解质溶液和过氧化物酶溶液的混合溶液中，通过静电作用，使过氧化物酶沉积吸附在载体表面，吸附20min～60min后，用缓冲液冲洗2min～20min；e.重复d步骤至少一次，即得固定化过氧化物酶。