[发明专利]温敏型蛋白质分子印迹整体柱及其制备方法和应用

摘要

温敏型蛋白质分子印迹整体柱及其制备方法和应用，本发明属于高分子材料制备技术及其在蛋白质分离分析领域的应用，具体地说涉及一种新型蛋白质分子印迹整体柱。采用简便温和的方法合成无机硅胶整体柱骨架，继而以蛋白质为模板，通过温敏型功能单体和交联剂在无机硅胶骨架表面接枝蛋白质印迹材料从而得到温敏型蛋白质分子印迹整体柱。获得的温敏型蛋白质分子印迹整体柱具有较强的模板蛋白识别能力。本发明制备的温敏型蛋白质分子印迹整体柱，将分子印迹的专一识别特性和整体柱的在线分离的特性相结合，操作简单、条件温和、成本低廉，为蛋白质组学研究提供了一种高丰度蛋白质去除的新方法。

主权项

一种温敏型蛋白质分子印迹整体柱的制备方法，其特征是，该方法包括如下步骤：(a)将两种硅烷化试剂加入到有机溶剂中，混合均匀；(b)在(a)中加入硝酸作为催化剂，混合均匀；(c)将(b)液体灌注到毛细管柱或高效液相色谱柱中，模具两端密封，在40℃-50℃垂直放置12-36小时；(d)反应结束后，将毛细管柱或高效液相色谱柱分别接入到注射泵或高效液相色谱体系，用甲醇冲洗柱体，制得毛细管硅胶整体柱骨架或高效液相色谱硅胶整体柱骨架；(e)将功能单体与交联剂溶于三羟甲基氨基甲烷烷-盐酸Tris-HCl缓冲溶液中；(f)在(e)通入氮气除氧后加入模板分子；(g)随后在(f)中加入引发剂和加速剂，立即涡旋混合均匀；(h)保持(g)在0-5℃，将缓冲溶液利用色谱泵淋洗(d)中已制备好的硅胶骨架，然后整体柱骨架进行聚合反应；(i)聚合反应结束后，用氯化钠溶液洗脱整体柱骨架上的模板蛋白，然后用三羟甲基氨基甲烷-盐酸Tris-HCl缓冲溶液冲洗整体柱至色谱基线平衡，就得到温敏型蛋白质分子印迹整体柱。