[发明专利]一种黄菖蒲愈伤组织的培养方法

摘要

本发明公开了一种黄菖蒲愈伤组织的培养方法：当黄菖蒲种子胚芽上的愈伤组织直径超过0.5cm时，将其从种子胚芽上切除，接种到新鲜的固体继代培养基上，进行继代培养，此后每2周继代培养一次；取出一粒愈伤组织在无菌滤纸上用镊子夹成小块，放入新鲜的培养液中，在25℃、90转/分钟条件下培养2周，形成愈伤组织悬浮液，将愈伤组织悬浮液按1∶30(v/v)接种到新鲜的培养液中进行继代培养，继代培养周期为2周；当需要使用愈伤组织进行快速繁殖或者转基因时，使用50目孔径的无菌尼龙膜过滤愈伤组织悬浮液，得到的大块愈伤组织转接到固体继代培养基上备用，过滤后剩余的愈伤组织悬浮液继续培养。本发明工艺简单，愈伤组织诱导迅速。

主权项

一种黄菖蒲愈伤组织的培养方法，其特征在于它包括如下步骤：(1)当黄菖蒲种子胚芽上的愈伤组织直径超过0.5cm时，将其从种子胚芽上切除，接种到新鲜的固体继代培养基上，进行继代培养，此后每2周继代培养一次；(2)取出一粒经步骤(1)继代培养的愈伤组织在无菌滤纸上用镊子夹成直径为0.1～0.2cm的小块，放入新鲜的培养液中，在25℃、90转/分钟条件下培养2周，形成愈伤组织悬浮液，将愈伤组织悬浮液按1∶30(v/v)接种到新鲜的培养液中进行继代培养，继代培养周期为2周；(3)当需要使用愈伤组织进行快速繁殖或者转基因时，使用50目孔径的无菌尼龙膜过滤步骤(2)中的愈伤组织悬浮液，得到的大块愈伤组织转接到固体继代培养基上备用，过滤后剩余的愈伤组织悬浮液继续按照步骤(2)的方法培养；步骤(1)和(3)中，所述的固体培养基组分如下：MS培养基，另加终浓度为30g/L的蔗糖，500mg/L的水解酪蛋白，2mg/L 2，4-二氯苯氧基乙酸，3g/L琼脂糖；步骤(2)中，所述的培养液组分如下：MS培养基，另加终浓度为30g/L的蔗糖、500mg/L的水解酪蛋白、2mg/L 2，4-二氯苯氧基乙酸。