[发明专利]多重定量核酸扩增及解链测定法

摘要

多重定量核酸扩增及解链测定法。本发明涉及应用被标记相同荧光报告标记但各自具有不同解链温度的复数个杂交探针，能够同时扩增、检测并定量复数种核酸靶的单管多重测定法。所述测定法可应用多组杂交探针进一步多重化，每组探针被标记独立的荧光报告标记。

主权项

在单个样品容器中同时多重实时PCR扩增、检测并定量一种或更多种靶核酸的方法，其包括步骤：(a)使怀疑含有一种或更多种靶核酸的样品与至少一组寡核苷酸探针相接触，其中所述组内每个寡核苷酸探针被标记相同的一个或更多个报告基团，其中每个所述标记寡核苷酸探针i.充分互补于至少一种靶核酸的至少一个子序列；ii.能够以不同于同组内其它标记寡核苷酸探针解链温度的解链温度与相应靶核酸结合；(b)在包括温度变化区间的扩增反应循环中扩增样品中的靶核酸，其中所述标记寡核苷酸探针从与相应靶核酸的杂合子解离；(c)检测在至少部分所述温度变化区间上来自所述报告基团的光发射；以及(d)对步骤(c)中在温度变化区间的至少所述部分上检测的光发射的一阶导数进行作图；(e)确定步骤(d)中作图的所述导数的最大值；(f)重复步骤(b)至(e)复数次；以及(g)将步骤(e)确定的所述导数最大值相对于步骤(b)至(e)的循环数或重复数目进行作图，并确定步骤(e)中确定的数值到达预设阈值时的循环数或重复数目，从而定量所述靶核酸的相对量。