[发明专利]一种尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶的制备方法无效
| 申请号： | 201010166710.3 | 申请日： | 2010-05-10 |
| 公开（公告）号： | CN102242103A | 公开（公告）日： | 2011-11-16 |
| 发明（设计）人： | 薛百忠;李小军;王宏英;薛雁;李秀林;丁忠福;薄学军 | 申请（专利权）人： | 辽宁诺康医药有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/64 | 分类号： | C12N9/64 |
| 代理公司： | 沈阳晨创科技专利代理有限责任公司 21001 | 代理人： | 张晨 |
| 地址： | 110000 辽宁*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 一种尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶的制备方法，其具体制备步骤为：蛇毒经浸泡溶解、离心；上清液经DEAE-Sephadex??A-50离子交换层析；含有效成分的洗脱液经透析；透析样品再经Q-Sepharos离子交换层析；含有效成分的洗脱液经透析；透析样品再经阴离子葡聚糖凝胶柱层析，即可得到单一成份的类凝血酶；本方法可以在常温下进行操作，并具有工艺稳定、适合规模化生产、操作简单、产率高、产品纯度高等特点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 蝮蛇 蛇毒 凝血酶 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶的制备方法，其特征在于：在常温下，从尖吻蝮蛇蛇毒中提取类血凝酶的步骤为：(1)、尖吻蝮蛇蛇毒用缓冲液浸泡、溶解过夜，离心去除沉淀，得上清液；(2)、蛇毒上清液经DEAE Sephadex A 50离子交换层析，上样结束后，用pH7.5的Tris HCl缓冲溶液进行洗脱，紫外检测仪280nm检测，至读数达到基线后，再用pH7.5含0～0.1M NaCL的Tris HCl缓冲溶液梯度洗脱，紫外检测仪280nm检测，收集活性峰，目的类凝血酶为第4峰；(3)、第4峰用pH8.0的Tris HCl缓冲溶液透析；(4)、透析后样品经Q Sepharos离子交换层析，上样结束后，用pH8.0的Tris HCl缓冲溶液进行洗脱，紫外检测仪280nm检测，至读数达到基线后，再用pH8.0含0～0.1M NaCL的Tris HCl缓冲溶液梯度洗脱，紫外检测仪280nm检测，收集活性峰，目的类凝血酶为第3峰；(5)、第3峰用pH7.5的Tris HCl缓冲溶液透析；(6)、透析后样品经阴离子葡聚糖凝胶层析，上样结束后，用pH7.5的Tris HCl缓冲溶液进行洗脱，紫外检测仪280nm检测，至读数达到基线后，再用pH7.5含0～0.1M NaCL的Tris HCl缓冲溶液梯度洗脱，紫外检测仪280nm检测，收集挂柱峰，得到单一成份的尖吻蝮蛇蛇毒类凝血酶。
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