[发明专利]保持病毒活性的高通量切向流分离海洋藻类病毒的方法

摘要

本发明公开了一种保持病毒活性的高通量切向流分离海洋藻类病毒的方法，其特征在于包括下述步骤：1)在4～8℃的低温和暗室条件下进行一级过滤，去除直径大于0.2μm的非病毒性颗粒或细菌；然后经切向流系统进行浓缩处理，可获得粗浓缩病毒液；2)在无菌、4～8℃和暗室条件下进行二级过滤，进一步去除直径大于0.22μm的非病毒性颗粒和一级过滤操作中可能污染的杂菌，得到纯度较高的浓缩病毒液；3)特异性海洋藻病毒的分离。本发明可以高通量的处理大批量的海水样品，并且保持病毒活性，对特异性的海洋浮游藻类病毒的分离而言具有操作简单、方便、快捷等特点。

主权项

一种保持病毒活性的高通量切向流分离海洋藻类病毒的方法，其特征在于包括下述步骤：1)在4～8℃的低温和暗室条件下进行一级过滤；首先用0.2μm的滤芯对海水样品进行预过滤处理：调节蠕动泵的泵速为90～100rpm之间，去除直径大于0.2μm的颗粒或细菌，得到预处理后的海水样品；整个操作在4～8℃的暗室条件下进行；然后用切向流膜包对预处理后的海水样品进行超滤浓缩处理：调节蠕动泵的泵速在110～120rpm之间；首先关闭透过液阀门，打开回流液阀门，然后慢慢开启透过液阀门，调节回流液阀门至如下参数：进水压Pinlet＝1～2ba，回流压Poutlet＝0.5～1ba，按体积比1000∶1～500∶1浓缩，对预处理后的海水样品反复进行切向流渗透，获得粗浓缩病毒液；2)在无菌、4～8℃和暗室条件下进行二级过滤；首先用0.1％～0.5％(M/V)的小牛血清白蛋白润湿0.22μm无菌针头式过滤器，在该过滤器中对粗浓缩病毒液进行过滤，进一步去除直径大于0.22μm的非病毒性颗粒和一级过滤操作中可能污染的杂菌，得到纯度较高的浓缩病毒液；3)特异性海洋藻病毒的分离；用经二级过滤的浓缩病毒液，对预先培养的不同种类的海洋藻细胞进行反复的液体感染，即可建立藻病毒-宿主藻的特异性系统，分离出与浓缩病毒液中具有特异性的海洋藻类病毒。