[发明专利]手足口病LAMP检测试剂盒及其检测方法

摘要

本发明属生物技术领域，涉及一种用于检测手足口病主要病原体柯萨奇病毒A16型(Cox A16)和肠道病毒71型(EV71)的LAMP试剂盒及其建立方法和应用。该试剂盒包含检测柯萨奇病毒A16型四条LAMP引物的LAMP反应液和检测肠道病毒71型的四条LAMP引物的LAMP反应液。经检测验证，本发明试剂盒具有良好的特异性灵敏度，扩增快速、高效，且鉴定简便。本发明的检测体系在64℃等温条件下，能快速、方便、高效、高特异、高灵敏地检测到柯萨奇病毒A16型和肠道病毒71型，不需要复杂仪器，能较好满足对手足口病的临床检测，易于大范围推广应用。

主权项

一种手足口病病原体LAMP检测试剂盒，包含以下成分(1)病毒RNA提取试剂病毒RNA的抽提可以采用常规的Trizol法，也可使用各生物公司生产的病毒RNA抽提试剂盒。(2)LAMP检测反应液①反应液Cox A16‑用于检测柯萨奇病毒A16型含有以下成分：10x LAMP缓冲液(200mmol/L Tris‑HCl，100mmol/L KCl，20mmol/LMgSO4，100mmol/L(NH4)SO4，1.0％Tritonx‑100)；100mmol/L MgSO4；25mmol/LdNTP；5mol/L betaine(甜菜碱)；20umol/L引物CoxA16‑FIP；20umol/L引物CoxA16‑BIP；5umol/L引物CoxA16‑F3；5umol/L引物CoxA16‑B3；DEPC处理水。其中引物序列为：CoxA16‑FIP：5‑AAGTRGGTTTCGGAGCCCCTTTTTTAGCCAAACCCAATGGTGAG‑3CoxA16‑BIP：5‑TTYGCTTGGCARACTGCTACCATTTTAGGGGACTGACACTTGAGC‑3CoxA16‑F3：5‑ACATGCGCTTTGAYGCTGAA‑3CoxA16‑B3：5‑GCACTGGCTGGTGACATG‑3②反应液EV71‑用于检测肠道病毒71型10x LAMP缓冲液(200mmol/L Tris‑HCl，100mmol/L KCl，20mmol/LMgSO4，100mmol/L(NH4)SO4，1.0％Tritonx‑100)；100mmol/LMgSO4；25mmol/LdNTP；5mol/L betaine(甜菜碱)；20umol/L引物EV71‑FIP；20umol/L引物EV71‑BIP；5umol/L引物EV71‑F3；5umol/L引物EV71‑B3；DEPC处理水。其中引物序列为：EV71‑FIP：5‑CAACTTCCCCGGTGGGTGTGTTTTCCTACATGCGCTTTGATGCA‑3EV71‑BIP：5‑TATGTTTGTGCCACCTGGAGCCTTTTGGGGTTAGTGGCGGTTTG‑3EV71‑F3：5‑GCGCAAATGCGTAGAAAGG‑3EV71‑B3：5‑AGGGTCTGACAGCTTGACAA‑3③酶混合液包括Bst DNA聚合酶(8U/ul)和AMV逆转录酶(8U/ul)