[发明专利]一种利用有色稻米发酵废糟培养豹斑毒鹅膏的方法

摘要

本发明涉及富含微量元素有色稻米发酵后的废糟培养豹斑毒鹅膏的方法。豹斑毒鹅膏含有较多毒素，尤以毒蝇碱对蝇虫具有显著致死力，是一种很好的生物杀虫剂，但豹斑毒鹅膏人工培养生长速度较慢，发酵菌丝体得率低。富含微量元素有色稻米通过微生物发酵加工成功能酒酿后会产生发酵废糟，发酵废糟中仍有较高含量的未被微生物转化的微量元素以及丰富的C、N源，因此利用该发酵废糟培养豹斑毒鹅膏既可提高菌丝体产率，又充分利用了有色稻米加工副产物。用该新型方法培养豹斑毒鹅膏菌后，粗提活性杀病虫物质，以用于防治林木病虫。本发明主要包括菌种的培养、液体种子培养、深层液体发酵培养、有色稻米加工副产物利用、杀病虫活性粗提物提取等。

主权项

一种利用富含微量元素的有色稻米发酵废糟培养豹斑毒鹅膏的方法，其特征是将豹斑毒鹅膏子实体接种至新鲜的固体斜面上进行培养，待斜面长好后接种至含较低浓度的富含微量元素的有色稻米发酵废糟的液体培养基中进行种子的培养，即对菌种加以驯化；再接入添加了足量富含微量元素的有色稻米发酵废糟的液体培养基中进行深层液体发酵培养；由于富含微量元素的有色稻米发酵废糟中含有丰富的硒、铁和锌等微量元素以及丰富的C、N源，所以该混合发酵液中营养物质丰富，这样既可提高该菌人工培养菌丝体产率，又充分消化和利用有色稻米加工副产物；发酵结束后，将菌丝体中杀病虫活性成分进行粗提，以用于林木病虫防治；步骤为：1)待用菌种的培养：出发菌株为豹斑毒鹅膏菌；①斜面培养：培养基配方以g/L计：马铃薯200、琼脂20、葡萄糖20、硫酸镁2.0、磷酸二氢钾3.0，富含微量元素有色稻米发酵废糟2.5，pH为6；培养方法：取豹斑毒鹅膏菌子实体中心部分接种于新鲜的斜面上，在28℃下培养30天左右；②500mL一级摇瓶种子培养，装液量150mL：培养基配方以g/L计：马铃薯200、葡萄糖20、硫酸镁2.0、磷酸二氢钾3.0、维生素B10.01，蛋白胨5，富含微量元素有色稻米发酵废糟2.5，pH为6；培养方法：将培养好的斜面接种至事先灭菌的摇瓶中，在28±1℃下，转速110rpm下培养30天；③1000mL二级摇瓶种子培养，装液量400mL：培养基配方：与一级摇瓶种子培养基配方相同；培养方法：将培养好的一级种子以10％的接种量接种至事先灭菌的摇瓶中，在28±1℃下，转速110rpm下培养30天，即成待用菌种；2)50L一级液体种子培养，装液量25-30L：①一级液体种子培养基配方以g/L计：葡萄糖10、麸皮50，麸皮水煮后取水溶性麸皮汁、酵母膏3.0、维生素B10.01、硫酸镁2.0、磷酸二氢钾3.0、富含微量元素的有色稻米发酵废糟5，pH为6；②控制工艺：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后按接种量5％-10％接入待用菌种，温度28±1℃，罐压0.05Mpa，通气量1∶0.3，V/V，搅拌转速100rpm；③转罐标准：发酵时间30-40天，菌丝球上浮三分之一，镜检有锁状联合，无杂菌；3)500L二级液体种子培养，装液量250-300L：①培养基配方与一级液体种子配方相同；②控制工艺：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后按接种量10％-15％接入一级种子，温度28±1℃，罐压0.05Mpa，通气量1∶0.3，V/V，搅拌转速100rpm；③转罐标准：发酵时间30-40天，菌丝球上浮三分之一，镜检有锁状联合，无杂菌；4)3000L深层液体发酵培养，装液量1800L：①发酵培养基配方以g/L计：葡萄糖5、麸皮50，麸皮水煮后取水溶性麸皮汁、酵母膏3.0、维生素B10.01、硫酸镁2.0、磷酸二氢钾3.0、富含微量元素的有色稻米发酵废糟10，pH为6；②控制工艺：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后按接种量10％-15％接入二级种子，温度28±1℃，罐压0.05Mpa，通气量1∶0.3，V/V，搅拌转速100rpm；③放罐标准：发酵时间30-40天，菌丝球上浮二分之一，镜检有锁状联合，菌丝球不能自溶；5)杀病虫活性粗提物提取：将上述培养液超声破碎2-3h，过滤浓缩后，用0.22μm滤膜过滤除菌即得；6)杀病虫活性粗提物成分鉴定：将所提出的粗提物用GC-MS分析其所含毒素成分。