[发明专利]富营养化水体中浮游植物叶绿素a的分析测定方法

摘要

富营养化水体中浮游植物叶绿素a的分析测定方法，是提取、分析并测定富营养化水体中浮游植物的叶绿素a的一种新方法，涉及环境工程水环境修复技术领域。将采集的水样，依次经过抽滤、冷冻后，加入热乙醇，水浴、超声后避光萃取若干小时，然后离心取上清液，采用分光光度法测定水体中叶绿素的含量。本发明样品提取及测定操作简单、快捷，能最大程度的提取浮游植物中的叶绿素，萃取程度高、低毒害、准确性好、检测限低、检测浓度范围广，解决了传统研磨法叶绿素流失程度高，萃取效率低，使用丙酮萃取对人体有一定的毒性的缺陷，适用于富营养化水体中浮游植物叶绿素的快速提取和准确测定。

主权项

富营养化水体中浮游植物叶绿素a的分析测定方法，具体步骤如下：(1)样品的前处理：按照传统的检测水体中浮游植物的叶绿素的取样方法采集水样，将200～500ml的水样通过抽滤器抽滤，将抽滤后的滤膜以及附着于其上的浮游植物置于10～25mL具塞离心管中，然后放入-18℃冰箱中冷冻6～8小时；(2)样品的萃取：从冰箱取出步骤(1)的具塞离心管恢复至室温状态后，向离心管中加入10mL 80℃的90％乙醇，于80℃水浴2min后，于超声波清洗机内超声10min，然后避光静置萃取3～5h后以4000r/min的转速离心10min，取上清液待测；(3)上清液的测定及水体中浮游植物叶绿素a的浓度计算：取步骤(2)所得上清液在分光光度计上测定上清液的叶绿素a的吸光度；首先以90％乙醇作空白吸光度测定，对上清液吸光度进行校正；而后开始测定上清液的吸光度，先在665nm波长测上清液吸光系数E665，再在750nm波长测上清液吸光系数E750，然后在装有上清液的比色皿中加入0.1～0.2毫升1.0mol/L盐酸进行酸化，加盖摇匀，静置1min后重新在665nm波长测定经过酸化处理后的上清液的吸光系数A665，再在750nm波长测其吸光系数A750，按下式计算水体中浮游植物叶绿素a的浓度： Chla = 27.9 V 1 [ ( E 665 - E 750 ) - ( A 665 - A 750 ) ] V 2 式中：Chla——叶绿素a浓度(ug/L)；V1——乙醇萃取液定容后的体积(L)；V2——水样的体积(L)；E665，A665——665nm波长处的吸光系数；E750，A750——750nm波长处的吸光系数。