[发明专利]花培聚合低植酸突变基因和铁蛋白外源基因培育富铁水稻的方法

摘要

本发明公开的花培聚合低植酸突变基因和铁蛋白外源基因培育富铁水稻的方法，其步骤如下：对低植酸突变系和铁蛋白转基因系进行生化分析、分子检测和矿质元素含量测定，筛选出高无机磷含量的低植酸突变系，以及稻米富铁的铁蛋白转基因系；配制低植酸突变系×铁蛋白转基因系，获得F1植株；利用花培一次成苗法，获得花培试管苗；练苗后，种于大田，收获2n单株；再对其进行无机磷含量检测和外源铁蛋白基因PCR分析，筛选出集低植酸突变基因和外源铁蛋白基因双重表达的花培系。按本发明培育出的水稻品种，稻米铁含量较高，人体易吸收，可利用性更好，且方法简便快速，在较短的育种周期内，可以获得稳定理想的高效富铁新材料。

主权项

花培聚合低植酸突变基因和铁蛋白外源基因培育富铁水稻的方法，包括以下步骤：1)收集低植酸突变体和外源铁蛋白转基因系水稻材料；按常规方法田间种植管理，选留结实、籽粒饱满的水稻种子；2)用钼酸铵比色法检测步骤1)水稻种子的无机磷，确定水稻种子的低植酸：钼酸铵比色法的显色剂由1体积3M浓硫酸，1体积2.5％的钼酸铵，1体积的10％的抗坏血酸和2体积蒸馏水配制而成；以含磷含量＞1.0mg/g，记为低植酸系；3)用PCR分子检测步骤1)水稻种子的外源铁蛋白基因，正义引物P1：5’-ATCTTGCTGTTCCTTCTGTTCC-3’和反义引物P2：5’-ATTGTTGCGTTCTGCCACAC-3’，凡扩增出400bp片段，记为外源铁蛋白基因阳性系，并用外源铁蛋白基因阳性系测定ICP-MS矿质元素铁含量，筛选出稻米铁含量＞10μg/g，记为富含铁元素的外源蛋白转基因系；4)取步骤2)和3)筛选到的水稻材料，配制低植酸突变系×铁蛋白转基因系杂交组合，获得F1植株；5)取步骤4)得到的F1植株，利用花培一次成苗法，经过愈伤组织诱导、分化、生根培养，获得花培试管苗；将花培试管苗经过练苗后种于大田，收获结实2n单株；花培一次成苗培养基为：MS+KT 4.0mg/L+NAA 3.0mg/L+2，4-D0.01mg/L+蔗糖50g/L+琼脂5g/L；6)取步骤5)筛选到的植株，再对其进行无机磷含量检测和外源铁蛋白基因PCR分析，筛选出集低植酸突变基因和铁蛋白基因双重表达的花培系；7)取步骤6)得到的双表达花培系植株，在田间种植，根据株型、叶色、穗粒饱满和米粒透明筛选出相应的富铁水稻材料。