[发明专利]一种乳酸菌细胞高通透性微胶囊的制备方法及应用

摘要

本发明提供了一种乳酸菌细胞高通透性微胶囊制备方法，属于生物工程技术领域。用液心包囊乳酸菌制备方法制得的含菌微胶囊，经高密度培养、生物酶处理，在囊壁形成多孔结构，使囊内乳酸菌细胞极易透过囊壁，释放到囊外的基质中，提高了连续接种的效率，降低了单位产品(发酵乳制品、发酵果汁等)接种成本，具有广阔的市场前景。

主权项

一种乳酸菌细胞高通透性微胶囊的制备方法，包括：将冷冻干燥的乳酸菌接种到MRS培养基将菌种活化两次，然后将活化的菌种接种到乳清或MRS培养基中，30-44℃培养18小时，5000rpm，离心10min，弃去上清液，将菌体悬浮于质量比2％的无菌蔗糖溶液中，与10倍含有质量比1％-3％氯化钙、浓度为1％-5％无菌淀粉溶液混合，通过微囊化细胞无菌制备装置，滴入无菌的含质量0.1％吐温80、0.3％-0.8％海藻酸钠的溶液中，所得胶囊用无菌水冲洗后，放入1％氯化钙溶液中硬化20-40分钟，过滤，弃去氯化钙溶液，用无菌水冲洗后，将胶囊放入1％-3％的壳聚糖淀粉混合溶液中，其中壳聚糖∶淀粉＝1∶6，30min后取出，用无菌水冲洗后，置于无菌改良乳清培养基中，在37℃恒定pH6.5培养至培养基中总糖含量低于1％，更换无菌改良乳清培养基，继续在37℃恒定pH6.5培养，重复3批，微胶囊内细胞密度达1011cfu/g，过滤，去除培养基，即制成高密度乳酸菌微胶囊，将微胶囊置于含0.1％-0.3％α-淀粉酶(中温型)和0.5％-0.8％糖化酶的溶液中，pH为5.5-6.5，35-40℃保温2-6小时，制成乳酸菌细胞高通透性微胶囊，其中MRS培养基：蛋白胨      10g    牛肉膏      10g     酵母提取物  5gK2HPO4      2g     柠檬酸二铵  2g      乙酸钠      5g葡萄糖      20g    吐温80      1mL     MgSO4.7H2O  0.58gMnSO4.4H2O  0.25g  蒸馏水      1000mL  pH          6.2-6.4；改良乳清培养基：乳清粉  60g     植物蛋白水解液  20g    酵母粉  0.8gK2HPO4  4g      碳酸钙          8g     海藻糖  5g蒸馏水  1000mL  pH              6.8-7.2。