[发明专利]一种克隆湖羊肌细胞生成素基因编码区全序列的方法无效
| 申请号： | 201010187641.4 | 申请日： | 2010-05-28 |
| 公开（公告）号： | CN101899433A | 公开（公告）日： | 2010-12-01 |
| 发明（设计）人： | 李碧春;许峰;秦玉蓉;阴彦辉;张振韬;高波;陈国宏 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12N15/12 |
| 代理公司： | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人： | 卢亚丽 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因克隆等领域，具体涉及一种克隆湖羊肌细胞生成素基因编码区全序列的方法。该方法是依据已发表的波尔山羊肌细胞生成素基因序列，针对三个外显子设计三对具有末端互补序列的特异性引物并引入酶切位点，以湖羊基因组DNA为模板，扩增肌细胞生成素外显子并切胶回收，以回收的片段为模板，通过重叠PCR将其拼接得到湖羊肌细胞生成素基因编码区全序列，其与FJ607135序列，同源性达99％。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 克隆 湖羊 细胞 生成 基因 编码 序列 方法 | ||
【主权项】：
1.一种克隆湖羊肌细胞生成素基因编码区全序列的方法，其特征在于：步骤一：设计并合成三对具有末端互补序列的特异性引物并引入酶切位点：Ex1F：5’-AGCGGATCCATGGAGCTGTATGAGACCT-3’；Ex1R：5’-GCATTCACTGGGCACCCCTGGCTGGGGTCC-3’；Ex2F：5’-GGACCCCAGCCAGGGGTGCCCAGTGAATGC-3’；Ex2R：5’-CTGGGAGCAGATGATCCCCTGGGTTGGGGC-3’；Ex3F：5’-GCCCCAACCCAGGGGATCATCTGCTCCCAG-3’；Ex3R：5’-AGCGAATTCTCAGTTTGGTATGGTTTCA-3’步骤二：以湖羊基因组DNA为模板，分别以Ex1F、Ex1R；Ex2F、Ex2R；Ex3F、Ex3R为引物，扩增肌细胞生成素外显子并切胶回收，以回收的片段为模板，通过重叠PCR将其拼接成SEQNO.1所示的序列，即湖羊肌细胞生成素基因编码区全序列。
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