[发明专利]一种聚氨酯纳米纤维固定化酶的制备方法

摘要

本发明提供了一种聚氨酯纳米纤维固定化酶的制备方法，其特征在于通过如下步骤制备：(1)以聚氨酯为原料，以一定配比的N，N-二甲基甲酰胺和四氢呋喃为溶剂，或者以二甲基乙酰胺为溶剂，添加一定比例的LiCl制得电纺液，通过静电纺丝制备出聚氨酯纳米纤维；(2)通过物理吸附的方法将惰性蛋白质吸附在纤维表面，获得表面改性的聚氨酯纳米纤维；(3)利用戊二醛作为交联剂，通过共价键结合的方法将酶固定化在表面改性的纳米纤维上。利用本发明的方法将酶固定化在聚氨酯纳米纤维上，可以有效提高酶的稳定性，尤其是该发明制备的固定化酶具有在有机溶剂中失活或者在高温下失活后，重新放置于缓冲溶液中能够逐步恢复大部分活性的特性，从而使其在有机溶剂中或者高温条件下具有更好的稳定性和更长的使用寿命，并且制备过程简单。

主权项

一种聚氨酯纳米纤维固定化酶的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)聚氨酯纳米纤维膜的制备：将聚氨酯溶于有机溶剂中，配成重量百分比为10～20％的溶液，添加相对于聚氨酯重量1～5％的LiCl，充分溶解后，注入到静电纺丝装置中，在电压20～30千伏，喷丝头溶液流量为0.1-0.5毫升/小时、接收距离为10～20厘米的条件下进行静电纺丝，获得纤维直径为100～500nm的聚氨酯纳米纤维膜；将纳米纤维膜在60℃烘箱中干燥24h，再用去离子水中洗涤；(2)利用蛋白质对聚氨酯纳米纤维膜进行表面改性：将聚氨酯纳米纤维膜投入到含有1～10mg/ml蛋白质的磷酸盐缓冲液中(pH7.0，0.1M)，在4～25℃下震荡2～12h，震荡速度为50～150转/分钟；取出聚氨酯纳米纤维膜，用缓冲液充分洗涤直至清洗液中没有蛋白质被检测出；(3)将酶固定化于蛋白质表面改性的聚氨酯纳米纤维膜上：将蛋白质表面改性的聚氨酯纳米纤维膜浸入到含有0.1～2％戊二醛和0.1～5mg/ml酶的缓冲液中，在室温下震荡2～12h，震荡速度为50～150转/分钟；取出聚氨酯纳米纤维膜，用缓冲液充分洗涤直至清洗液中没有蛋白质被检测出。