[发明专利]一种提高变构霉素发酵产量的制备方法

摘要

本发明提供一种变构酸的制备方法，将变构霉素溶解于0.1-0.5M的缓冲液A中，配制成变构霉素溶液，再将脂肪酶溶解于缓冲液B中，配制酶液；将酶液加入到变构霉素溶液中，于25-40℃下反应0.5-5.0h，反应结束，将反应液pH调至4.0，用等体积的萃取溶剂A萃取；取水层将pH调至2.0并用等体积的萃取溶剂B萃取，取有机层，用饱和盐水洗涤后再用Na2SO4干燥，真空蒸馏浓缩溶剂，得到变构酸粗品；将所述变构酸的粗品再以乙酸和二氯甲烷溶剂为梯度洗脱的洗脱剂，取含变构酸的柱层析产品用丙酮重结晶，得到变构酸产品。本发明利用脂肪酶对发酵的变构霉素进行水解，获得变构酸，具有反应条件温和、反应专一、高效等优点。

主权项

一种提高变构霉素发酵产量的制备方法，其特征在于所述工艺方法包括如下步骤：(1)将放线菌菌种接入种子培养基，于27～30℃摇瓶培养20～26h后得种子液，再取种子液，接入发酵培养基在26～35℃温度条件下进行发酵培养；(2)发酵培养50～90h后，发酵液的pH升至4.5～7时，补加前体物质，所述前体物质的补加总质量为所述发酵液的0.1％～0.3％g/mL；所述前体物质为单一下列物质之一或是按顺序补加下列任意几种物质：顺丁烯二酸酐、甘氨酸、蛋氨酸、α-酮戊二酸、丁二酸盐、丙二酸、柠檬酸、谷氨酸或2，3-二甲基马来酸酐，补加后在27～30℃继续发酵10～30小时，所述补加前体类物质以水溶液的形式加入，所述的前体类物质水溶液的浓度为10～80g/L，流速为0.2～0.8mL/min，且继续保持发酵液pH在4.0～7.0之间；(3)发酵结束，离心分离出沉淀，再用有机溶剂浸泡沉淀5h～20小时，所述的沉淀与有机溶剂的质量体积比列为1∶3～1∶10g/ml，所述的有机溶剂为下列之一或任意比例的组合：丙酮、甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷，再取有机溶剂层于旋转蒸发仪上将有机溶剂蒸发干净，剩余物质即为发酵产物变构霉样品。