[发明专利]一种PVY/CMV表面等离子体共振检测方法

摘要

本发明公开一种PVY/CMV表面等离子体共振检测方法，属于材料检测方法。本发明是通过下述几个步骤实现的：1、制备PVY/CMV抗原和单克隆体；2、制备生物传感器芯片；3、制作标准曲线，得到病毒计算公式；之后利用病毒计算公式测定PVY/CMV的含量。本发明利用表面等离子体波共振方法，灵敏度高，既可以定性、也可以定量的检测PVY/CMV，且操作方便，费用低廉。

主权项

一种PVY/CMV表面等离子体共振检测方法，其特征在于是按照以下步骤进行的：(一)制备PVY/CMV抗原和PVY/CMV单克隆体；(二)制备生物传感器芯片；a、芯片的制备在平整的膜片上镀上40～60nm的金膜后用Piranha溶液清洗，再用纯水和无水乙醇淋洗；b、基膜的固定将芯片浸入MUOH的乙醇中12～20h，再用超纯水和无水乙醇淋洗，氮气吹干；c、连接臂分子的固定用等体积的NaOH和表氯醇的二乙二醇二甲醚溶液的混合物与芯片上的MUOH反应4h活化羧基，之后将含有NaOH的右旋糖苷溶液加入芯片表面反应20h，再用等体积的NaOH和0.6M表氯醇的二乙二醇二甲醚溶液混合物活化右旋糖苷表面4h，用超纯水和无水乙醇淋洗，氮气吹干；d、PVY/CMV单抗体的固定将芯片放入玻璃管中，加入EDC和NHS等体积的混合液反应10min(8～12min)活化羧基，之后用HEPES冲洗，再将步骤(一)制备的PVY单克隆抗体溶液注入到芯片表面，在25℃孵育16～22min后用乙醇胺‑HCl于25℃处理10min以封闭未被活化的羧基，再用HEPES冲洗。e、玻片的保存将步骤d中制作好的玻片浸泡在10mM HEPES中在4℃保存。(三)制作标准曲线，得到PVY/CMV病毒计算公式；(四)、测定PVY/CMV的含量I、制取PVY/CMV病毒粗提液；II、取50μL病毒粗提液用HEPES稀释后注入SPR仪器中，测定其共振响应值RU，代入步骤(三)得到的标准计算公式即可求出样品中病毒的含量。