[发明专利]一种紫肉甘薯红色素有效组分的分离及检测方法

摘要

本发明提供了一种紫肉甘薯红色素有效组分的分离及检测方法，通过反相硅胶逐层析分离、洗脱和浓缩干燥，将紫肉甘薯总红色素分离为11个纯度很高的主组分或单体。对这11个组分进行HPLC分析，计算组分纯度，利用体外抗氧化实验测试组分抗氧化活性。根据HPLC法对组分纯度分析，组分中主要化合物的纯度在40-99.9％之间，体外抗氧化活性能力测试利用总还原能力、DPPH自由基抑制、羟基自由基抑制和亚油酸脂质过氧化抑制能力等四个体系进行评价，本发明提供的紫肉甘薯红色素有效组分可在制备抗氧化药品、保健品及作为天然食品添加剂应用。本发明方法设计合理，能快速准确的得到有效成分，在生产中更易于药品或食品的质量控制。

主权项

一种紫肉甘薯红色素有效组分的分离及检测方法，所述方法是通过一次过反相硅胶柱，利用甲醇浓度从20％至40％的梯度洗脱而得到相对纯度在40％ 99.8％纯度的11个组分；所述反相硅胶是指在正相硅胶母核上接上8碳、18碳等脂肪酸链的硅胶，或以ODS、RP 冠名的硅胶材料；所述方法的具体步骤如下：(1)反相硅胶柱填装：称取反相硅胶溶解于纯甲醇中，缓慢倒入径高比1∶8 1∶15的玻璃层析柱中，以层析柱阀门控制每分钟1ml的流速，流出甲醇；让硅胶均匀的沉积填装入柱后，待液面高出硅胶面4cm左右时，关掉阀门，加压，让硅胶柱床平整、踏实，硅胶柱高度控制在15cm；(2)反相硅胶柱流动相平衡：用3倍柱体积含20％甲醇和3％甲酸水溶液，以1.5 2.5ml/min流速平衡硅胶柱；(3)分离工艺：称取装柱硅胶量的1/10 1/20的紫肉甘薯总红色素于含20％甲醇的3％盐酸 水溶液中充分溶解后，缓慢加入平衡好的硅胶柱；然后甲醇从20％到40％按一个百分点一个柱体积浓度继增冲洗硅胶层析柱，流速控制在2.0ml/min，紫肉甘薯红色素在反相硅胶柱上有很明显的11个色素带呈现，收集时根据色带进行收集，得到11个组分；(4)利用HPLC对11个组分进行纯度测试：利用YMC反相硅胶柱，以甲醇 水为流动相梯度洗脱，520nm下检测，以色谱图上峰个数和峰面积及百分比进行纯度计算，11个组分的纯度在40％ 99.8％.范围内；(5)抗氧化活性测试：先以还原力为测试对象间接对11组分的总抗氧化能力进行整体评估，然后选用以N为中心的DPPH自由基和以氧(O)为中心的羟基自由基来考察对自由基的抑制能力，选用亚油酸来评价11组分的对脂质过氧化能力的评价。