[发明专利]一种魔芋细胞液体培养葡甘聚糖的方法

摘要

本发明提供了一种用液体培养法产葡甘聚糖的方法，对影响魔芋细胞液体培养产次生代谢物葡甘聚糖产生的几种主要因子进行了研究，结果表明，在魔芋细胞液体培养生产葡甘聚糖的过程中，MS培养基为最适培养基，第15天左右葡甘聚糖的含量达到最大值，pH为6.0时利于葡甘聚糖的合成，25g/L的乳糖为最适碳源，2，4-D在1.0mg/L时葡甘聚糖的积累效果明显，其它浓度的2，4-D和NAA对葡甘聚糖积累效果不明显，细胞分裂素6-BA使葡甘聚糖积累明显高于KT，且1.5mg/L时葡甘聚糖积累量最高。最后得到MS+2，4-D(1.0mg/L)+6-BA(1.5mg/L)+乳糖(25mg/L)为魔芋细胞培养生产葡甘聚糖的较优培养基，其最高葡甘聚糖积累量可达125.70mg/100mL。

主权项

一种魔芋细胞液体培养葡甘聚糖的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)愈伤组织的诱导：用水将花魔芋块茎表面清洗干净，经过酒精浸泡、汞浸泡，最后用灭菌水洗涤，削去表皮并切成小块，将消毒好的魔芋块茎切块移入愈伤诱导养基中，控制愈伤诱导养基的pH为6.0，置于暗培养室中培养后将膨大的组织再次切成小块，移入新配置的愈伤诱导培养基进一步进行培养；(2)细胞液体培养：将经过愈伤诱导培养基培养的生长旺盛的愈伤组织切碎，接种在盛有液体培养基的容器中培养，得到培养液；(3)葡甘聚糖制取：将培养液离心处理，上清液在搅拌状态下加入乙醇，使培养液使含醇量50％，放置24h后，再次离心处理，得到得沉淀物，用50％乙醇处理数次，沉淀物冷冻干燥得白色物质，即葡甘露聚糖。