[发明专利]人源S100A4蛋白的纯化与鉴定无效
| 申请号： | 201010234434.X | 申请日： | 2010-07-23 |
| 公开（公告）号： | CN102336827A | 公开（公告）日： | 2012-02-01 |
| 发明（设计）人： | 王天辉;陈昀贇;刘子泉;徐传香;王德刚;崔博;佘晓俊;张娜;陈学伟;安改红;刘洪涛 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C07K1/18;C07K1/14;G01N33/53;G01N27/447 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 300050*** | 国省代码： | 天津;12 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了一种人源S100A4蛋白的纯化与鉴定方法。本发明采用离子交换层析法对表达载体pET32a-S100A4的表达产物纯化后，进行SDS-PAGE鉴定和Western-Blot鉴定。为了加快纯化速度，防止蛋白在纯化过程中降解，采用透析法进行脱盐处理。 | ||
| 搜索关键词： | 人源 s100a4 蛋白 纯化 鉴定 | ||
【主权项】：
权利要求1所述的人源S100A4蛋白的纯化与鉴定，其特征在于包括如下步骤：(1)S100A4蛋白的纯化①将离子交换层析柱HiTrapTM DEAE FF(GE Health)以约5倍体积的起始缓冲液平衡。②平衡以后，将破碎上清以起始缓冲液稀释3‑5倍以0.45μm的除菌滤器过滤除菌后，以5mL/min的流速注射器手推上样，收集穿透液。③以起始缓冲液平衡层析柱，用不同浓度梯度的洗脱缓冲液进行洗脱，以1.5mL/管收集，进行SDS‑PAGE鉴定和纯度鉴定。(2)S100A4蛋白的脱盐采用透析的方法进行脱盐处理，简言之，透析袋中盛有人源S100A4蛋白溶液，再将透析袋放入生理盐水中，在4℃环境下透析24小时后，进行SDS‑PAGE分析。(3)蛋白鉴定a SDS‑PAGE鉴定①将上一步骤中收集的破碎后上清液吸取25μl，再加入25μl的2×SDS上样缓冲液，混匀；②取破碎后的沉淀少许，加入25μl的超纯水重悬后，再加入25μl的2×SDS上样缓冲液，混匀；③将上述两者100℃煮沸5min，并短暂离心，进行SDS‑PAGE电泳，鉴定其表达形式。b Western‑Blot鉴定按照常规Western‑Blot法操作规程操作，以山羊抗S100A4(来源：Santa cruz公司)为一抗，进行鉴定所表达的S100A4蛋白。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所，未经中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201010234434.X/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：一种驱动组合机构
- 下一篇：基于热模型的混合动力汽车动态降额控制方法
