[发明专利]一种不需选择标记基因的洁净DNA转化植物的方法

摘要

本发明公开了一种不需选择标记基因的洁净DNA转化植物的方法，包括以下步骤：1)、制备目的基因表达框：根据所要导入的目的基因表达框所在的质粒载体的序列特征，采用合适的限制性内切酶将构建好的目的基因表达框DNA片段从质粒载体上切割下来，通过凝胶电泳分离割胶回收，获得目的基因表达框DNA；2)、制备DNA微弹载体悬液；3)、植物愈伤组织轰击转化；4)、植株再生；5)、转基因植株的筛选。利用本发明技术进行植物转基因，能够从根本上解决选择标记基因和质粒载体框架DNA序列等多余DNA序列对转基因植物及转基因食品的影响，从而获得除目的基因表达框无其他多余DNA的转基因植株。

主权项

1.一种不需选择标记基因的洁净DNA转化植物的方法，其特征是依次包括以下步骤：1)、制备目的基因表达框：根据所要导入的目的基因表达框所在的质粒载体的序列特征，采用合适的限制性内切酶将构建好的目的基因表达框DNA片段从质粒载体上切割下来，通过凝胶电泳分离割胶回收，获得目的基因表达框DNA，作为基因枪轰击植物细胞的外源DNA；2)、制备DNA微弹载体悬液：取600mg金粉/ml的金粉悬液30～50μl，加2.5mol/L的CaCl₂溶液45～55μL和0.1mol/L亚精胺溶液15～25μL，震荡混匀后，加入含DNA总量为2μg的所述目的基因表达框DNA的溶液，振荡，离心，弃上清，使DNA沉淀到金粉颗粒表面从而得DNA微弹沉淀；将DNA微弹沉淀用无水乙醇进行洗涤，振荡，离心，弃上清；再加无水乙醇60～80μl，得DNA微弹载体悬液；3)、植物愈伤组织轰击转化：利用基因枪将上述DNA微弹载体悬液轰击到植株胚性愈伤组织体内，轰击后的愈伤组织静置暗培养，以便使轰击细胞恢复；4)、植株再生：将上述步骤3)所得的轰击后暗培养恢复过的植物愈伤组织直接转移到预分化培养基上进行预分化，接着进行分化，获得再生植株；5)、转基因植株的筛选。