[发明专利]大规模工业化从牛、羊血液中提取超氧化物歧化酶的方法及应用于该方法中的刀片式搅拌机

摘要

本发明公开了一种大规模工业化从牛、羊血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其将新鲜的牛血液或羊血液经过抗凝、低渗溶血、超滤、通过带有热源/冷源的搅拌机快速升降温、沉淀、3级温度处理：第一级：45-55℃；第二级：55-60℃；第三级：60-65℃、盐析、超滤及浓缩、冷冻干燥等生产步骤处理后即可同时得到比活和纯度略有不同的两组超氧化物歧化酶成品，与现有技术相比，本发明具有工艺简单、生产周期短、产品收率及比活高、质量稳定、成本低等特点，经济效益好。

主权项

一种大规模工业化从牛、羊血液中提取超氧化物歧化酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)在牛血液或羊血液中加入占血液重量比0.3 0.6％的柠檬酸钠抗凝剂，在4℃的低温下静置30 60分钟，待溶液分层后，去掉大部分上清；2)加入等量体积的蒸馏水，搅拌，低渗溶血30分钟，再放置40 60分钟，待溶液分层后，对上清液进行超滤，得上清液a；对分层后的沉淀边加热边用带热源的搅拌机搅拌，使其在5 10分钟内迅速加温至40 50℃，保温10 30分钟后，边降温边用带冷源的搅拌机搅拌，使其在5 10分钟内迅速降至室温，4000 6000转/分钟离心15 20分钟后，在4℃的低温下静置10 30分钟后除去沉淀，得到上清液b；3)将步骤2)获得的上清液a、b混合，对混合后的上清液进行三级温度梯度处理：第一级：45 55℃；第二级：55 60℃；第三级：60 65℃；每一级梯度边加热边用带热源的搅拌机搅拌，使其在5 10分钟内迅速升温到相应温度后，保温10 30分钟后，边降温边用带冷源的搅拌机搅拌，以使其在5 10分钟内迅速降温，4000 6000转/分钟离心15 20分钟后，在4℃的低温下静置10 30分钟后除去沉淀，得上清液；4)对步骤3)中最后获得的上清液进行两级盐析：首先加入硫酸铵，使盐析液饱和度50 60％，充分搅拌使硫酸铵完全溶解，在温度为4 6℃下放置15 30小时后，4000 6000转/分钟离心15 20分钟后，在4℃的低温下静置10 30分钟后除去沉淀，得上清液；5)在步骤4)获得的上清液中继续加入硫酸铵，使盐析液饱和度为90 95％，充分搅拌使硫酸铵完全溶解，在温度为4 6℃的低温下静置20 30小时后，4000 6000转/分钟离心15 20分钟后，得沉淀一；对离心后的上清继续在4 6℃的低温下静置20 30小时后，经漏斗抽滤后，收集沉淀，得沉淀二；6)用浓度0.1 0.3M，pH为7.0 7.5的磷酸钾缓冲液分别溶解沉淀一和沉淀二，完全溶解后，透析脱盐去除残留的硫酸铵，经超滤浓缩和冷冻，即可分别得到比活和纯度略有不同的两组超氧化物歧化酶成品。