[发明专利]一种海洋黑曲霉生产耐盐纤维素酶的固体发酵方法

摘要

本发明公开了一种海洋黑曲霉生产耐盐纤维素酶的固体发酵方法。包括如下步骤：1)从东海近海10～20m深处的泥土里筛选得到一株海洋黑曲霉；2)海洋黑曲霉接种于PDA培养基上培养，得到斜面孢子，斜面孢子保藏于4℃；3)斜面孢子接种于PDA-1培养基上培养，得到活化的孢子；4)活化的孢子接种于茄子瓶斜面，42℃培养74h，得到扩培的茄子瓶斜面孢子；5)扩培得到的茄子瓶斜面孢子用灭菌的人工海水稀释到108个孢子/ml，接种于固体发酵产酶培养基，发酵8～12天，得到纤维素酶。本发明具有培养基粗狂、来源广泛和价廉等特点，生产的纤维素酶可以在较高盐含量的条件下降解纤维素，并且在高盐环境下酶异常稳定，为该水解物的后续应用打下基础。

主权项

一种海洋黑曲霉生产耐盐纤维素酶的固体发酵方法，其特征在于包括如下步骤：1)从东海近海10～20m深处的泥土里筛选得到一株海洋黑曲霉(Aspergillus sp)，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址为中国.武汉.武汉大学，保藏中心保藏编号为CCTCC NO：M2010132；2)海洋黑曲霉接种于PDA培养基上，40℃下培养90h，得到斜面孢子，斜面孢子保藏于4℃；3)斜面孢子接种于PDA‑1培养基，在40℃下培养90h，得到活化的孢子；4)60g茄子瓶斜面培养基装入250ml茄子瓶后压实成斜面，瓶口用8层纱布封口，得到茄子瓶斜面，活化的孢子接种于茄子瓶斜面，42℃培养74h，得到扩培的茄子瓶斜面孢子；5)400ml人工海水装入500ml容量瓶内，放入灭菌锅，在121℃，灭菌20min，得到灭菌的人工海水，扩培得到的茄子瓶斜面孢子用灭菌的人工海水稀释到108个孢子/ml，接种于固体发酵产酶培养基，在250ml锥形瓶内，接种量0.1～0.7ml、起始pH 6.0～7.0、温度42～44℃和发酵8～12天，得到纤维素酶。