[发明专利]一种马哈利CDR-1樱桃砧木分子鉴定方法

摘要

本发明公开了一种马哈利CDR-1樱桃砧木分子鉴定方法，包括以下步骤：1)取样及样品处理；2)DNA提取及其纯度和浓度检测；3)引物筛选和RAPD分析；4)分析标准图谱得到马哈利CDR-1樱桃砧木有11个特有RAPD引物，共扩增出了14条特有DNA指纹标记：分别是OPA01(411)，OPA09(974)，OPA19(380)，OPB07(1100)，OPB07(1300)，OPC07(900)，OPD01(1300)，OPD02(469)，OPD08(555)，OPD08(823)，OPG18(700)，OPO06(609)，OPO19(705)，OPAI20(279)；5)将待鉴定的樱桃砧木按照上述步骤进行分析，得到所需要鉴定樱桃砧木的随机扩增多态DNA图谱，将此随机扩增多态DNA图谱与标准图谱比较判定，可以判断是否为马哈利CDR-1樱桃砧木。具有快速、稳定、费用低的特点。

主权项

一种马哈利CDR 1樱桃砧木分子鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取样及样品处理；采用带木质芽接繁殖技术进行繁殖现有各种不同樱桃品种，随机选取生长状况一致的无性繁殖系个体5株，每株采集20片新梢顶部新鲜幼叶放入冰盒，迅速带回实验室置于 80℃超低温冰箱中储存备用；2)DNA提取及其纯度和浓度检测；樱桃总DNA的提取以生长期幼叶为材料，每个个体取鲜叶0.2g，采用改良2×CTAB法提取总DNA，并略加修改；使用0.6％琼脂糖对所获基因组DNA的纯度进行检测，利用蛋白核酸定量测定仪检测DNA浓度；然后将备用DNA溶于适量0.1×TE缓冲液中，在 20℃保存；3)引物筛选和RAPD分析；在对樱桃进行RAPD分析的PCR扩增体系优化后，选取3个在形态上差异比较大的樱桃品种进行RAPD引物筛选，从130个随机引物中筛选出46个扩增带清晰、多态性明显、重复性好的引物进行PCR扩增；在T Gradient PCR扩增仪上进行DNA扩增；扩增产物用1.6％、含0.5μg/ml EB的琼脂糖凝胶电泳分离2 3h，电压为6V/cm；在UV光下检测扩增结果并通过凝胶成像系统照相，分别得到随机扩增多态DNA标准图谱；4)分析标准图谱得到马哈利CDR 1樱桃砧木有11个特有RAPD引物，共扩增出了14条特有DNA指纹标记：分别是OPA01(411)，OPA09(974)，OPA19(380)，OPB07(1100)，OPB07(1300)，OPC07(900)，OPD01(1300)，OPD02(469)，OPD08(555)，OPD08(823)，OPG18(700)，OPO06(609)，OPO19(705)，OPAI20(279)；5)将待鉴定的樱桃砧木按照上述步骤进行分析，得到所需要鉴定樱桃砧木的随机扩增多态DNA图谱，将此随机扩增多态DNA图谱与标准图谱比较判定，可以判断是否为马哈利CDR 1樱桃砧木。