[发明专利]一种制备L-高苯丙氨酸的方法

摘要

本发明公开了一种以高苯丙氨酸脱氢酶为生物催化剂制备单一光学纯L-高苯丙氨酸的工艺方法，具体包括以下步骤：在反应液中加入底物、甲酸铵、高苯丙氨酸脱氢酶和由甲酸脱氢酶介导的辅酶循环再生体系，振荡或搅动反应后从反应体系中过滤直接得到L-高苯丙氨酸产物，滤液循环用于下一轮反应，反应温度为15～40℃。本发明利用高苯丙氨酸脱氢酶，配合辅酶循环再生体系，采用简单过滤循环工艺制备L-高苯丙氨酸，底物浓度达到560mM，所需的辅酶NAD+浓度较低，并且可循环多次使用而达到忽略辅酶成本的水平，得率超过95％，具有重要应用价值。

主权项

1.一种制备L-高苯丙氨酸的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)向反应液中加入底物、甲酸铵、高苯丙氨酸脱氢酶以及由甲酸脱氢酶介导的辅酶循环再生体系，配制得到反应体系；所述反应液为水或pH为7.0～9.0的缓冲液；所述底物为2-氧代-4-苯基丁酸或其酯，其结构式为：其中R为H或C_1～2的烷基，底物浓度为10mM～680mM；所述甲酸铵和底物摩尔比为1∶1～10∶1；所述高苯丙氨酸脱氢酶的浓度大于等于5U/mL，高苯丙氨酸脱氢酶与甲酸脱氢酶摩尔比例为0.8～1.0∶1；所述由甲酸脱氢酶介导的辅酶循环再生体系中NAD⁺浓度大于等于0.1mM；(2)步骤(1)所得反应体系在振荡或搅拌条件下，用盐酸、硫酸、醋酸、甲酸、氢氧化钠溶液、氢氧化钾溶液或氨水调节反应体系溶液pH至7.0～9.0，于15～50℃下，反应制备L-高苯丙氨酸，反应完成后过滤分离L-高苯丙氨酸和滤液，得到L-高苯丙氨酸。