[发明专利]一种快速简便构建下一代高通量测序文库的方法

摘要

本发明涉及下一代高通量测序文库构建方法，适用于Illumina和Roche 454测序平台。该方法包括以下设计思想：主要实验部分在微珠(Beads)上或其他固体表面进行，微珠与含有测序接头序列的双链寡核苷酸相连，DNA/RNA热变性成单链后，与微珠上双链寡核苷酸退火杂交。加入含有聚合酶或反转录酶的溶液进行延伸。清洁后加入另一测序接头和T4DNA连接酶进行连接，最后将产物寡核苷酸从微珠上洗脱下，聚合酶链反应扩增后，测序文库构建完成。主要构建过程依次包括杂交、延伸、连接、洗脱和聚合酶链反应步骤。本发明有益的效果：实验过程快速、简洁、低成本。

主权项

一种快速简便构建下一代高通量测序文库的方法，包含以下内容：1)设计思想主要实验部分在特殊设计的微珠(Beads)上或其他固体表面进行，微珠或其他固体表面与含有测序接头序列的双链寡核苷酸相连，双链寡核苷酸一条链的3′端悬出数个随机合成碱基，另一条链3′端与微珠相连。2)实施步骤：DNA/RNA片断热变性成单链后，与微珠退火杂交。清洁后加入含有聚合酶(Taq)或反转录酶的溶液进行延伸。如选用可3′末端悬A的聚合酶延伸，再次清洁后可直接加入含3′端悬T的另一测序接头和T4DNA连接酶进行双链连接，否则需使用可悬A的酶加A后进行另一接头连接。然后将产物寡核苷酸从微珠上洗脱下，聚合酶链反应(PCR)扩增后，测序文库构建完成。