[发明专利]一种植物酪氨酸酶的染色方法

摘要

本发明涉及一种植物酪氨酸酶的染色方法，该方法是先提取植物的酪氨酸酶后进行聚丙烯酰胺凝胶非变性电泳，电泳后的凝胶板放入含有L-多巴、3-甲基-2-苯并噻唑啉酮腙、过氧化氢酶和二甲基甲酰胺的染色液中染色，直到凝胶板棕色反应带清晰出现后用清水冲洗终止显色反应，棕色带即为酪氨酸酶反应带。该种方法程序简单，对仪器设备要求不高，染色专一性强，而且可以确定酪氨酸酶的大致分子量，结果准确可靠。

主权项

植物酪氨酸酶的染色方法，其特征是包括如下步骤：(1)酪氨酸酶提取，取盐地碱蓬幼苗幼叶按照料液比1∶5～10(w/v)加入60mmol L‑1磷酸缓冲液(pH 5.7)于冰浴研磨，研磨液以8000～10000g于4℃离心15～30分钟，上清液即为酪氨酸酶提取液，于‑70℃保存备用。(2)取(1)中所得酪氨酸酶提取液进行聚丙烯酰胺凝胶非变性电泳，每个泳道加样20～30μL酪氨酸酶提取液，样品中不加巯基乙醇并且不用沸水煮以保持蛋白质活性。(3)取(2)中电泳后的凝胶板进行酪氨酸酶的活性染色，将凝胶板放入60mmol L‑1磷酸缓冲液(pH6.8))中平衡10～20分钟。然后转移到100ml染色反应液中染色30～60分钟，染色液成分是磷酸缓冲液(pH6.8)包含5mmol L‑1L‑多巴，4mmol L‑13‑甲基‑2‑苯并噻唑啉酮腙，50μg mL‑1过氧化氢酶，2％N，N′‑二甲基甲酰胺。凝胶板棕色反应带清晰出现后用清水冲洗终止显色反应，棕色带即为酪氨酸酶反应带。