[发明专利]一种枫杨高效组织培养繁殖方法

摘要

本发明公开了一种枫杨高效组织培养繁殖方法，其采用枫杨优良单株根部萌条为外植体，经消毒后接种在含有启动培养基的培养瓶中，以普通日光灯为光源，每日照光16小时，温度22～25℃、湿度为50％～65％，培养45天，分化长成试管芽苗，然后经剪切，转接于含有增殖培养基的培养瓶中，进行增殖培养，不断增殖，再剪切后接种于含有壮苗培养基的培养瓶中，进行壮苗培养，25天后去掉基部愈伤组织和部分叶片，留3～4片叶片，接种于含有生根处理产生根原基培养基的培养瓶中，进行生根培养6～10天，清洗后移栽到含有泥炭和黄心土的体积比为3∶2的基质中，20天后生根成活。本发明所述的枫杨生根率达89％以上，且种苗质量好。

主权项

一种枫杨高效组织培养繁殖方法，包括以下步骤：(1)选材及消毒处理：采用经选育的枫杨优良单株根部萌发的10～20厘米长萌条茎段为外植体，然后将选取的外植体剪切成2～4cm长的小段，经70％酒精消毒45秒，再用浓度为0.1％的升汞溶液消毒8～10分钟，最后用无菌水冲洗3～5次；(2)试管芽苗培养：在超净的工作台上及无菌条件下，将步骤(1)中消毒后的外植体剪去接触消毒液的伤口，留1～2cm带芽茎段接种在经消毒的含有启动培养基的培养瓶中，然后将其置于普通日光灯为光源的环境下，其中光照强度为1000～1500lx，每日光照时间为16小时，温度为22～25℃，湿度为50％～65％，培养45天，分化长成试管芽苗；(3)增殖培养：将从步骤(2)中长成的试管芽苗，剪切带有1～2个腋芽的节段或顶芽后，在超净的工作台上及无菌条件下，转接于经消毒的含有增殖培养基的培养瓶中，然后将其置于普通日光灯为光源的环境下，在光照强度为1000～1500lx，每日光照时间为16小时，温度为22～25℃，湿度为50％～65％的条件下，对芽苗进行增殖培养，使其不断增殖，直至达到所需要的繁殖生产规模；(4)壮苗培养：将步骤(3)中增殖后的试管芽苗，剪切带有1～2个腋芽的节段或顶芽后，在超净的工作台上及无菌条件下，接种于经消毒的含有壮苗培养基的培养瓶中，在光照强度为1000～1500lx，每日光照时间为16小时，温度为22～25℃，湿度为50％～65％的条件下，进行壮苗培养，25天后进入下一步骤；(5)生根培养：将步骤(4)中经过壮苗培养后的试管壮苗，去掉基部愈伤组织和部分叶片，留3～4片叶片，在超净的工作台上及无菌条件下，接种于经消毒的含有生根处理产生根原基培养基的培养瓶中，在光照强度为1000～1500lx，每日光照时间为16小时，温度为22～25℃，湿度为50％～65％的条件下，进行生根培养6～10天；(6)移栽、成活：将步骤(5)中经生根培养的带有根原基的无根小苗，取出清洗，移栽到含有泥炭和黄心土的基质中，其中泥炭与黄心土的体积比为：3∶2，然后浇透水，保持温度25～30℃，相对湿度85％以上，先遮光培养10天，后逐渐见光，20天后生根成活，在培养40～45天后，进行全光照；所述的启动培养基为：每升基本培养基+0.05～0.2mg N‑苯基‑N′‑(2‑氯‑4‑吡啶基)脲+0.75～1.0mg 6‑苄基嘌呤+0.02～0.1mg吲哚丁酸；所述的增殖培养基为：每升基本培养基+0.2～0.5mg噻苯隆+1.2～2.0mg 6‑苄基嘌呤+0.04～0.1mg吲哚丁酸+1000～2000mg活性炭；所述的壮苗培养基为：每升基本培养基+0.1～0.4mg噻苯隆+1.0～1.5mg6‑苄基嘌呤+0.08～0.2mg吲哚丁酸+1000～2000mg活性炭；所述的生根处理产生根原基培养基为：每升基本培养基+0.3～0.6mg α‑萘乙酸+0.5～0.8mg吲哚丁酸+2000～3000mg活性炭。