[发明专利]巣式PCR法扩增EGFR基因外显子21片段的方法无效
| 申请号： | 201010271751.9 | 申请日： | 2010-09-03 |
| 公开（公告）号： | CN101988125A | 公开（公告）日： | 2011-03-23 |
| 发明（设计）人： | 吴奇涵;蔡燕燕;顾海英 | 申请（专利权）人： | 华东师范大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 吴瑾谕 |
| 地址： | 200062 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及分子生物学领域，公开了一种用巣式PCR法扩增中EGFR基因外显子21片段的方法。步骤包括：（1）第一轮PCR扩增，以血浆DNA或石蜡切片DNA为模板，扩增25～35个循环，所用的引物为：C21F和C21R；（2）第二轮PCR扩增，以步骤（1）的第一轮PCR扩增产物为模板，扩增25～35个循环，所用的引物为：21F和21R。经过上述方法扩增所得到的DNA片段可满足测序的要求；扩增的产物经过序列分析，判断突变情况。本发明通过第一轮扩增，提高了含有目的片段的模板DNA浓度，可提高EGFR基因外显子21的扩增效率。 | ||
| 搜索关键词： | 巣式 pcr 扩增 egfr 基因 外显子 21 片段 方法 | ||
【主权项】：
巣式PCR法扩增 EGFR基因外显子21片段的方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）第一轮PCR扩增，以血浆DNA或石蜡切片DNA为模板，扩增25～35个循环，所用的引物为：C21F：5'‑AGCAGCGGGTTACATCTTC‑ 3'，C21R：5'‑CTCCTTACTTTGCCTCCTTC ‑3'；第一轮PCR扩增的条件和步骤为：A. 94～96℃预变性4～6min； B. 93～95℃变性20～40s，59～61℃退火20～40s，71～73℃延伸20～40s，25～35个循环；C. 然后71～73℃延伸5～10min；（2） 第二轮PCR扩增，以步骤（1）产物为模板，扩增25～35个循环，所用的引物为：21F： 5'‑TCTTCTCTGTTTCAGGGCATG ‑3'，21R： 5' ‑CTCCTTACTTTGCCTCCTTC‑ 3'；第二轮PCR扩增的条件和步骤为：A. 94～96℃预变性4～6min；B. 93～95℃变性20～40s，61～63℃退火20～40s，71～73℃延伸20～40s，25～35个循环；C. 然后71～73℃延伸5～10min。
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