[发明专利]一种根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法

摘要

本发明公开了一种根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法，通过以下步骤完成：稀释预处理、絮凝除蛋白、离子交换、浓缩除盐、酒精醇沉和真空干燥，由本发明所述的从根瘤菌发酵液中提取和精制根瘤菌胞外多糖的方法具有工艺步骤少，效率高、成本低、适宜工业化生产的特点，而且制备的胞外多糖纯度高。

主权项

一种根瘤菌胞外多糖的提取及精制方法，其特征是：由下述步骤完成：1)稀释预处理在发酵液中加入1～10倍体积的蒸馏水，采用稀碱调溶液pH至8～10，开启搅拌并加热至60～80℃，并持续0.2～5小时；2)絮凝除蛋白在经稀释预处理的根瘤菌发酵液中加入絮凝剂，然后用稀酸调整溶液pH至4～6，搅拌，当有大块絮状物出现时停止，采用10000g离心30～120min，收集上清液；3)离子交换上清液采用0.5～2BV速度上阴离子交换剂(Cl‑型)柱，采用酚‑硫酸法检测多糖，漏吸停止上柱，采用蒸馏水冲洗至无色为止，然后用2mol/L浓度的NaCl溶液洗脱，收集多糖洗脱峰；4)浓缩除盐收集的含多糖离子交换液，采取1000～100000Da分子量的滤膜，控制过滤压力0.3～2.8Mpa，浓缩至多糖质量浓度至15～40％时停止；5)酒精醇沉在多糖浓缩液中，缓慢加入2～4倍体积质量浓度≥95％的酒精，并采用稀酸调至pH4～7，然后降温至‑20～4℃，放置4～24小时醇沉，然后采用10000g离心30min，收集多糖沉淀物；6)真空干燥多糖沉淀置于40～70℃真空干燥箱内，控制相对真空度≥0.085Mpa，进行干燥，获得成品。