[发明专利]一种刺参球形病毒的分离方法

摘要

本发明涉及一种刺参球形病毒的分离方法。其特征在于包括刺参球形病毒粗提液的制备和高纯度的刺参球形病毒溶液制备两个步骤：刺参球形病毒粗提液的制备步骤是将携带刺参球形病毒的组织低温下研磨，用含抗生素的灭菌过滤海水冲洗后差速离心制得粗提液；高纯度的刺参球形病毒溶液制备步骤是将制得的粗提液用密度梯度离心方法分离得到病毒沉淀，将沉淀用TNE或PBS缓冲液溶解后制得高纯度的刺参球形病毒溶液。本发明的方法将差速和密度梯度离心结合了起来，并尽量减小污染和无菌操作。本发明的特点是过程简单、成本低，可大量获得刺参球形病毒材料，以满足刺参疾病的早期诊断、预防和治疗的病毒材料的需求。

主权项

‑种刺参球形病毒的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：1)刺参球形病毒粗提液的制备：首先将携带有刺参球形病毒的组织用无菌生理盐水洗净后，在低温下将组织剪碎、用组织研磨器研磨，再将研磨物用含抗生素的灭菌过滤海水冲洗，将冲洗液收集到灭菌离心管中，在600～800g、4℃离心30min后，弃沉淀，取上清液在4℃、1500～1800g离心30min，弃沉淀取上清液后，在4℃、8500～9500g离心30min，取上清液，并将上清液悬浮于过滤灭菌海水配制的g/ml为25％的蔗糖垫中，4℃、15000～16000rpm离心60min，弃上清液，将沉淀悬浮于过滤灭菌的海水中制得刺参球形病毒粗提液；2)高纯度的刺参球形病毒溶液制备：将g/ml为10％、20％、30％、40％、50％的蔗糖溶液各取1.35ml，用无菌注射器按g/ml为50％、40％、30％、20％、10％的顺序依次将各蔗糖溶液由下到上铺在10cm的超速离心管中，并静置重层；将刺参球形病毒粗提液900～1000μL经磁力搅拌器低温搅拌30分钟后，注入离心管的重层的蔗糖溶液上方，在4℃、24000～26000rpm离心120min，收集从离心管由上到下数为第二层、第三层的条带，将收集的条带在15000～16000rpm 4℃离心45min，弃上清液，将刺参球形病毒沉淀用缓冲液溶解，即得到高纯度的刺参球形病毒溶液。