[发明专利]真菌(1-3)-β-D葡聚糖比色检测试剂盒的制备及其使用方法

摘要

本发明是利用微量真菌细胞壁成分(1-3)-β-D-Glucan激活鲎血细胞裂解物中G因子，从而水解显色基质(Boc-Val-leu-Gly-Arg-DIAN(N，N-二乙氨基苯胺)、Boc-leu-Gly-Arg-DIAN或Boc-Thr-Gly-Arg-DIAN，进而发生缩合反应而定性、定量检测(1-3)-β-D葡聚糖方法。发明内容：以人工合成显色基质Boc-Val-leu-Gly-Arg-DIAN(N，N-二乙氨基苯胺)、Boc-leu-Gly-Arg-DIAN或Boc-Thr-Gly-Arg-DIAN，利用微量(1-3)-β-D-Glucan特异性地激活鲎血细胞裂解物中的G因子、凝固酶原及凝固蛋白原，被激活的凝固酶水解显色基质释放出基团DIAN，DIAN与1-萘酚-4-磺酸钠、(1-萘酚-2-磺酸钠或1-萘酚-5-磺酸钠)在高碘酸钠存在下生成蓝色缩合物，在630-680nm波长处，酶原激活量与缩合物的吸光度在一定范围内呈线形关系，从而定量检测样品中(1-3)-β-D-Glucan浓度。该试剂盒可以用来早期诊断临床深部真菌感染。

主权项

真菌(1‑3)‑β‑D葡聚糖比色检测试剂盒的制备及其使用方法，以人工合成显色基质Boc‑Val‑leu‑Gly‑Arg‑DIAN(N，N‑二乙氨基苯胺)、Boc‑leu‑Gly‑Arg‑DIAN或Boc‑Thr‑Gly‑Arg‑DIAN(N，N‑二乙氨基苯胺)，利用微量(1‑3)‑β‑D葡聚糖特异性地激活东方鲎血细胞裂解物中含有的G因子、凝固酶原及凝固蛋白原，从而诱发东方鲎血细胞裂解物凝固化反应.被激活的凝固酶水解合成显色基质释放出显色基团DIAN(N，N‑二乙氨基苯胺)，DIAN与显色剂A(1‑萘酚‑4‑磺酸钠、1‑萘酚‑2‑磺酸钠或1‑萘酚‑5‑磺酸钠)在高碘酸钠显色剂B的存在下生成蓝色缩合物，在630‑680nm波长处，酶原激活量与形成的缩合物的吸收度在一定范围内呈线形关系，从而定量检测出样品中(1‑3)‑β‑D葡聚糖浓度；试验过程应严格按照使用说明书上具体操作方法进行操作，同时要注意一些操作过程中的注意事项；该试剂盒可以用来早期诊断临床深部真菌感染，作为临床诊断的参考之一。