[发明专利]一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法

摘要

本发明公开了一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法。该制备方法包括：ST细胞或IBRS-2细胞的复苏培养；ST细胞或IBRS-2细胞的生物反应器微载体培养；ST细胞或IBRS-2细胞的生物反应器微载体的连续培养；接种猪细小病毒培养；收集病毒液，灭活病毒，制成猪细小病毒灭活疫苗。本发明的猪细小病毒灭活疫苗的制备方法，为采用反应器微载体培养ST细胞的猪细小病毒工艺，微载体提供了更大的表面积，不仅能提高ST细胞密度，提高病毒滴度，而且反应器能自动监控细胞生长或病毒繁殖时的最适生化条件，每批反应器生产上清的病毒滴度均一批间小、质量稳定。

主权项

一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)ST细胞或IBRS‑2细胞的复苏培养；用方瓶培养从液氮中复苏的ST细胞或IBRS‑2细胞，培养条件包括：pH值7.0～7.3、温度35～37℃，培养基为DMEM；培养48～72h，培养至细胞浓度为3～6×105cells/ml，即可；(2)ST细胞或IBRS‑2细胞的生物反应器微载体培养；细胞接种密度为1～2×105cells/ml，微载体浓度为3～5g/L，溶氧为30％～60％，pH值7.0～7.3，温度35～37℃，转速40～60r/min，培养基为DMEM；培养至细胞浓度为3～5×106cells/ml；其中，微载体为球状载体Cytodex1或片状载体；(3)ST细胞或IBRS‑2细胞的生物反应器微载体的连续培养；以一定速度向生物反应器中连续添加新鲜的DMEM培养基，同时用相同的速度向外排出培养好的ST细胞或IBRS‑2细胞，保证ST细胞或IBRS‑2细胞在反应器中停留时间内扩增至浓度为3～5×106cells/ml，即可；(4)接种猪细小病毒培养；将猪细小病毒接种于连续培养ST细胞或IBRS‑2细胞的生物反应器中进行培养，接种MOI为0.01，培养条件包括：溶氧30‑60％、PH值7.1‑7.4、温度35‑37℃，使病毒含量达到≥106.0TCID50/ml；(5)收集病毒液，灭活病毒，制成猪细小病毒灭活疫苗。