[发明专利]提高乳酸菌胆盐水解酶活性的方法和培养基

摘要

提高乳酸菌胆盐水解酶活性的方法和培养基，本发明的技术要点在于：采用定向底物诱导、营养强化(增加细胞膜通透性以及添加乳酸菌生长因子)的方法，以提高乳酸菌胆盐水解酶的活性。从而提高乳酸菌胆固醇降解能力以及增强其定植人体肠道的能力和稳定性。大量的试验证实，采用本发明所述的方法处理具备产胆盐水解酶能力的乳酸菌，可使其乳酸菌胆盐水解酶活性提高1.5～3.5倍；当处理乳酸菌为CGMCC NO 1.580干酪乳杆菌干酪亚种时，获得的效果最优，可使其乳酸菌胆盐水解酶活性提高3.5倍。

主权项

提高乳酸菌胆盐水解酶活性的方法，包括如下步骤：①定向诱导：将待处理的具备产胆盐水解酶能力的乳酸菌活化，使菌体浓度达到108CFU/mL，以2％的比例加到MRSO液体培养基中进行耐受培养，每传代一次胆固醇的浓度增加0.15％，五次定向培养后，培养基中胆固醇的含量达到1％；选择生长良好的乳酸菌，将其在MRS液体培养基中培养，测定其在诱导驯化前后的胆盐水解酶活性变化，从中筛选出酶活提高一倍以上的菌株进行以下实验；②营养强化：在定向诱导后，将筛选出的胆盐水解酶活性提高一倍以上的乳酸菌菌株，按2％的比例接种到MRS1中培养，培养时间12‑48小时；所述培养基的配方如下：MRS液体培养基：蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母膏5.0g，葡萄糖20.0g，K2HPO4 2.0g，NaOAc 5.0g，MgSO4 0.2g，柠檬酸三铵2.0g，蒸馏水1000mL；MRSO液体培养基：在MRS液体培养基中，添加0.25～1.0％水溶性胆固醇及0.5％胆盐(牛磺胆酸钠)；MRS1液体培养基：在MRSO液体培养基中，添加0.1‑0.2％土温80，及1‑3％的50％鲜榨番茄汁；鲜榨番茄汁：先将番茄切成小块，加1倍的水打浆，过滤，滤液于4℃冰箱保存备用。