[发明专利]冷冻法提取棘皮动物变态前幼体DNA的方法无效
| 申请号： | 201010291347.8 | 申请日： | 2010-09-26 |
| 公开（公告）号： | CN102409038A | 公开（公告）日： | 2012-04-11 |
| 发明（设计）人： | 常亚青;赵新亚;丁君 | 申请（专利权）人： | 大连海洋大学 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 大连非凡专利事务所 21220 | 代理人： | 曲宝威 |
| 地址： | 116023 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 冷冻法提取棘皮动物变态前幼体DNA的方法，步骤为：取棘皮动物幼体放入离心管中，并在-80℃条件下冷冻保存；解冻后10分钟内向离心管中加入15ul裂解液，1ul的0.3mg/ml的蛋白酶K，然后水浴裂解3小时，每隔半小时振荡摇匀一次；裂解液的组分及终浓度为10mmol/L Tris-Cl，50mmol/LKCL，0.5％Tween-20，pH8.0；温升至85℃，水浴15分钟；裂解完的样品直接用于PCR扩增，获取扩增产物，微卫星扩增PCR体系组成如下：DNA模板1ul、10×buffer2.5ul、引物1.0ul/each、d NTP2.2ul、MgCl21.5ul、Taq0.35ul、ddH2O15.45ul、Total25ul。本方法操作简单，对操作者没有任何伤害。 | ||
| 搜索关键词： | 冷冻 提取 棘皮动物 变态 幼体 dna 方法 | ||
【主权项】：
一种冷冻法提取棘皮动物变态前幼体DNA的方法，其特征在于：步骤如下：a、在解剖镜下用微量移液器取棘皮动物幼体放入离心管中，并在‑80℃条件下冷冻保存；b、将装有棘皮动物幼体的离心管取出解冻，并在解冻后10分钟内向离心管中加入15ul裂解液，1ul的0.3mg/ml的蛋白酶K，然后放入55℃水浴锅中裂解3小时，期间每隔半小时振荡摇匀一次；所述裂解液的组分及终浓度为10mmol/LTris‑Cl，50mmol/L KCL，0.5％Tween‑20，PH8.0；c、裂解完后把水浴锅温度升至85℃，水浴15分钟，以灭活蛋白酶K；裂解完的样品直接用于PCR扩增，获取扩增产物，微卫星扩增PCR体系组成如下：反应体系 需加体积DNA模板 1ul10×buffer 2.5ul引物 1.0ul/eachd NTP 2.2ulMgCl2 1.5ulTaq 0.35uldd H2O 15.45ulTotal 25ul。
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