[发明专利]利用piggyBac转座子创制转绿色荧光蛋白基因叉尾斗鱼方法

摘要

本发明公开了一种利用piggyBac转座子创制转绿色荧光蛋白基因叉尾斗鱼方法。是先构建带有绿色荧光蛋白基因的piggyBac转座子及能够提供转座酶的辅助质粒，利用显微注射技术将这两种转座子导入到叉尾斗鱼受精卵内，依靠piggyBac转座子的转座特性，使绿色荧光蛋白基因导入到叉尾斗鱼基因组内，并得到稳定遗传和表达。本发明可以借助荧光标记基因筛选转基因叉尾斗鱼个体，这种转绿色荧光蛋白基因叉尾斗鱼能够提升叉尾斗鱼的观赏价值，达到育成具有特异性功能的叉尾斗鱼新品种。另外，开拓了piggyBac转座子应用于转基因鱼研究的先河，拓宽了转基因水产动物的研究空间。

主权项

一种利用piggyBac转座子创制转绿色荧光蛋白基因叉尾斗鱼方法，其特征在于该方法的步骤如下：(1)采用分子克隆技术构建获得带有绿色荧光标记基因的piggyBac转座质粒及能够提供转座酶的辅助质粒，piggyBac转座质粒包含piggyBac转座子的2个转座臂、Amp抗性基因、A3启动子、绿色荧光蛋白标志基因和SV40的多聚腺苷酸识别序列，辅助质粒包含piggyBac转座子的1个转座臂、Amp抗性基因、A3启动子和转座酶基因；(2)采用显微注射转基因方法，将piggyBac质粒及其能够提供转座酶的辅助质粒导入叉尾斗鱼受精卵，即转基因G0代叉尾斗鱼，饲养至成鱼以交配续代，即转基因G1代叉尾斗鱼，在G1代的胚胎发育至仔鱼时期，通过选择荧光标志基因获得稳定遗传的转基因叉尾斗鱼；(3)育成的转基因叉尾斗鱼能够用于基因功能研究的实验材料和提升其观赏价值。