[发明专利]生姜蛋白酶的三步双水相萃取方法

摘要

本发明涉及一种生姜蛋白酶的三步双水相萃取方法。取鲜姜汁，用硫酸铵、无水乙醇制备生姜蛋白酶粗酶，磷酸缓冲液溶解得到粗酶液。将聚乙二醇、硫酸铵、电解质按照一定比例配制，调pH，形成双水相体系。加入生姜蛋白酶粗酶液，将分液漏斗封口，反复倒置，充分混合均匀，室温下静置分相，使体系上下相分离完全。将下相盐相放出，存好。然后往上相中加入硫酸铵盐溶液，二次萃取分离后，放出下相盐相，存好。往上相中再次加入硫酸铵盐溶液，进行第三次萃取，收集下相盐相进行透析，透析完后冻干即得纯酶。

主权项

一种生姜蛋白酶的三步双水相萃取方法，其特征在于：由聚乙二醇、硫酸铵、电解质按照不同比例在一定条件下形成的双水相进行三步萃取生姜蛋白酶的提取方法，配制分子量为4000、浓度为30％的聚乙二醇溶液，10％的硫酸铵溶液和2％的NaCl电解质溶液，充分溶解后作为双水相体系，调节体系的pH为8.0，将双水相体系溶液倒入分液漏斗中进行分相，待分相完成后，每20mL双水相体系溶液中加入3mL生姜蛋白酶粗酶液，将分液漏斗封口，反复倒置2～3min，每分钟10～15次，将体系各组分充分混合均匀后，室温下静置分相2～3h，使体系上下相分离完全；生姜蛋白酶粗酶液进行第一步萃取后，将下相液放出存好，然后往上相中加入10mL20％的硫酸铵盐溶液，将分液漏斗封口，反复倒置2～3min，每分钟10～15次，将体系各组分充分混合均匀后，室温下静置分相2～3h，使体系上下相分离完全；生姜蛋白酶粗酶液进行两步纯化萃取后，将下相液放出存好，然后往上相中加入15mL12％的硫酸铵盐溶液，将分液漏斗封口，反复倒置2～3min，每分钟10～15次，将体系各组分充分混合均匀后，室温下静置分相2～3h，使体系上下相分离完全，经三步萃取纯化后，收集下相盐相进行透析，透析完后冻干即得纯酶。