[发明专利]一种黑麦草胚性愈伤组织的筛选和保存方法

摘要

本发明属于细胞工程技术领域，具体涉及一种获得黑麦草（LoliumL.）胚性愈伤组织及其再生能力保持的方法。愈伤组织诱导所用的材料是黑麦草的成熟种子胚；从成熟胚诱导愈伤组织，培养1月后，再经过4次继代培养，培养时间为2月，每2周继代1次；然后进行愈伤组织分化植株再生培养，分化出的植株继续进行继代培养，不能分化的愈伤组织扔弃；取再生后继代培养植株的茎节分生区进行第2次愈伤组织诱导，培养1月；愈伤组织再经过继代培养2月，每2周更换一次培养基，然后进行愈伤组织分化植株再生培养，不能分化的愈伤组织淘汰扔弃；对经过第2次分化再生的植株进行长期继代培养，在需要愈伤组织进行相关研究时，取这样的植株茎节分生区诱导并继代后获得需要的愈伤组织。本发明操作简单易行，能获得稳定的、高频的分化再生效率。

主权项

一种多年生黑麦草胚性愈伤组织的筛选和保存方法，包括从成熟胚诱导愈伤组织和及其继代培养、愈伤组织分化再生、植株继代、再生植株茎节分生组织区愈伤组织二次诱导、愈伤组织二次分化再生、植株的长期继代保存及长期保存的植株茎节分生组织区愈伤组织诱导及其继代和分化再生，其特征是：愈伤组织诱导所用的材料是黑麦草的成熟种子胚；从成熟胚诱导愈伤组织，培养1月后，再经过4次继代培养，培养时间为2月，每2周继代1次；然后进行愈伤组织分化植株再生培养，分化出的植株继续进行继代培养，不能分化的愈伤组织扔弃；取再生后继代培养植株的茎节分生区进行第2次愈伤组织诱导，培养1月；愈伤组织再经过继代培养2月，每2周更换一次培养基，然后进行愈伤组织分化植株再生培养，不能分化的愈伤组织淘汰扔弃；对经过第2次分化再生的植株进行长期继代培养，在需要愈伤组织进行相关研究时，取这样的植株茎节分生区诱导并继代后获得需要的愈伤组织；愈伤组织诱导培养基成分为：MS基本培养基+5～7mg/L 2，4‑二氯苯氧乙酸(2，4‑D)和0.1mg/L的激动素(KT)+麦芽糖30g/L+结冷胶2.4g/L，pH 5.8；愈伤组织继代培养基成分为：MS基本培养基+3mg/L 2，4‑D+麦芽糖30g/L+结冷胶2.4g/L，pH 5.8；愈伤组织分化植株再生培养基成分为：MS基本培养基+0.1mg/L 2，4‑D和0.5mg/L 6‑苄基嘌呤(6‑BA)+蔗糖40g/L+结冷胶2.4g/L，pH 5.8；植株继代培养基成分为：MS基本培养基+1～2mg/L 6‑BA+蔗糖30g/L+结冷胶2.4g/L，pH 5.8。