[发明专利]FoxM1c的DNA结合区蛋白高效结合肽及多肽结构序列的获取方法

摘要

本发明公开了一种FoxM1c的DNA结合区蛋白的高效结合肽及多肽结构序列的获取方法和目标物的用途。以FoxM1c的DNA结合区原核重组质粒诱导表达获得的蛋白为靶标，从噬菌体随机肽库筛选和获得一组靶向FoxM1c的高效结合多肽。包括：FoxM1c的DNA结合区原核重组质粒的构建，诱导表达和蛋白纯化制备；基于FoxM1c的DNA结合区蛋白的噬菌体随机肽库筛选与分析。经4轮筛选，获得富集靶向FoxM1c的结合肽噬菌体和多肽结构序列。目标物作为先导分子用于肿瘤等相关疾病的治疗药物研发和诊断。

主权项

FoxM1c的DNA结合区蛋白高效结合肽及多肽结构序列的获取方法，包含   （1）、利用pQE30原核高效表达系统，将编码FoxM1c的DNA结合区蛋白的DNA片段与pQE30质粒重组，构建重组表达质粒pQE‑D并转化原核宿主菌M15，所得宿主菌经诱导表达并通过亲和层析纯化及BCA法定量，制备获得FoxM1c的DNA结合区蛋白；（2）、以FoxM1c的DNA结合区蛋白为筛选靶标，利用噬菌体随机十二肽库筛选技术，通过“吸附－洗脱－扩增”的循环筛选获得富集噬菌体，经4轮筛选，将最后一轮筛选富集的噬菌体铺板获得靶向FoxM1c的DNA结合区蛋白的结合肽及多肽结构序列；所述靶向FoxM1c的DNA结合区蛋白的富集噬菌体至少含有以下一种多肽结构序列：第一组：WHL/Q/D/N ；第二组：DLY，DLLY，DHYN，DLNY；第三组：SSLWN/E ；第四组：HLDY，HLYE，YHLE，LYHDD，YHLEE；第五组：FYNL，NYFL；第六组：YPH，YPL，YPS；所述结合肽多肽结构序列分子对接在FoxM1上的结合结构域预测主要是Arg‑Arg(R‑R, aa：254，256) 和Glu‑Thr‑Ser‑Ala‑Asn‑Gly‑Lys(E‑T‑ S‑A‑N‑G‑K，aa：298‑304)。